CAJ | 학술논문

综合运用生物信息学和分子生物学技术,模拟PPV VP2蛋白表面不同Loop区插入O型FMDV VP1蛋白上多表位基因(VP1:21 ～40、141～160和200～213残基)空间构象,并在VP2N端引入通用型辅助性T淋巴细胞表位(PADRE),人工合成嵌合基因并克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTA中,转化E coli DH10Bac感受态细胞,经三抗筛选,获得重组杆状病毒表达质粒rBac-FMDV VP1∶PPV VP2,用脂质体法转染Sf9细胞.对rBac-FMDVVP1∶PPV VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光；用Western-blotting分析,在64 000处出现一条特异蛋白条带；电镜观察,重组VP2蛋白能够自主组装成病毒样颗粒.红细胞凝集试验证实,表达的嵌合蛋白PPV∶VP2-FMDV∶VP1具有与全病毒类似的血凝活性.
종합운용생물신식학화분자생물학기술,모의PPV VP2단백표면불동Loop구삽입O형FMDV VP1단백상다표위기인(VP1:21 ～40、141～160화200～213잔기)공간구상,병재VP2N단인입통용형보조성T림파세포표위(PADRE),인공합성감합기인병극륭도간상병독전이재체pFastBac HTA중,전화E coli DH10Bac감수태세포,경삼항사선,획득중조간상병독표체질립rBac-FMDV VP1∶PPV VP2,용지질체법전염Sf9세포.대rBac-FMDVVP1∶PPV VP2감염적Sf9세포,용간접면역형광시험(IFA)검측,구유특이성형광；용Western-blotting분석,재64 000처출현일조특이단백조대；전경관찰,중조VP2단백능구자주조장성병독양과립.홍세포응집시험증실,표체적감합단백PPV∶VP2-FMDV∶VP1구유여전병독유사적혈응활성.