江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
1期
20-27
,共8页
付三雄%张超%陈松%周晓婴%戚存扣
付三雄%張超%陳鬆%週曉嬰%慼存釦
부삼웅%장초%진송%주효영%척존구
甘蓝型油菜%丙酮酸激酶%RNA干扰%载体构建
甘藍型油菜%丙酮痠激酶%RNA榦擾%載體構建
감람형유채%병동산격매%RNA간우%재체구건
采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因.为构建甘蓝型油菜PK基因的RNA干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK基因长498 bp的siRNA靶序列,连接到pEASY-T1载体上,采用NotⅠ和Xho Ⅰ酶切,酶切产物连接到RNAi平台载体pHurricane的NotⅠ和Xho Ⅰ位点,通过多重PCR鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK基因反向重复框克隆到加入napin启动子的pCAMBIA1390表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK基因的RNAi载体.限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础.
採用基因芯片技術,從油菜中鑒定瞭一箇油分積纍優勢錶達基因即丙酮痠激酶(Pyruvate kinase,PK)基因.為構建甘藍型油菜PK基因的RNA榦擾(RNAi)載體,通過設計引物剋隆瞭PK基因長498 bp的siRNA靶序列,連接到pEASY-T1載體上,採用NotⅠ和Xho Ⅰ酶切,酶切產物連接到RNAi平檯載體pHurricane的NotⅠ和Xho Ⅰ位點,通過多重PCR鑒定證實載體構建成功,然後將上述PK基因反嚮重複框剋隆到加入napin啟動子的pCAMBIA1390錶達載體相應的酶切位點上,構建具有種子特異性錶達的PK基因的RNAi載體.限製性內切酶酶切證實載體構建成功,為進一步研究PK基因參與決定油菜油分積纍的分子機理和代謝調控奠定瞭基礎.
채용기인심편기술,종유채중감정료일개유분적루우세표체기인즉병동산격매(Pyruvate kinase,PK)기인.위구건감람형유채PK기인적RNA간우(RNAi)재체,통과설계인물극륭료PK기인장498 bp적siRNA파서렬,련접도pEASY-T1재체상,채용NotⅠ화Xho Ⅰ매절,매절산물련접도RNAi평태재체pHurricane적NotⅠ화Xho Ⅰ위점,통과다중PCR감정증실재체구건성공,연후장상술PK기인반향중복광극륭도가입napin계동자적pCAMBIA1390표체재체상응적매절위점상,구건구유충자특이성표체적PK기인적RNAi재체.한제성내절매매절증실재체구건성공,위진일보연구PK기인삼여결정유채유분적루적분자궤리화대사조공전정료기출.
