上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2013年
3期
257-262,279
,共7页
卿恺%陈芳源%沈莉菁%林文洁%孙瑞林%钟济华
卿愷%陳芳源%瀋莉菁%林文潔%孫瑞林%鐘濟華
경개%진방원%침리정%림문길%손서림%종제화
Notch1%急性T淋巴细胞白血病%斑马鱼%双荧光示踪
Notch1%急性T淋巴細胞白血病%斑馬魚%雙熒光示蹤
Notch1%급성T림파세포백혈병%반마어%쌍형광시종
目的 在血管内皮增强型绿色荧光蛋白标记的斑马鱼系(fli1-EGFP)中,转入Rag2启动子驱动的人源性截短型Notch1基因(ICN1),从中筛选并鉴定发生急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的斑马鱼,建立稳定传代的红绿双色示踪的T-ALL斑马鱼疾病模型.方法 构建Rag2-ICN1-EGFP质粒,显微注射到斑马鱼胚胎的单细胞期,利用荧光体视显微镜筛选F0代,并建立稳定传代的转基因鱼系.通过荧光体视显微镜、RT-PCR 、Western blotting验证ICN1 mRNA和蛋白的表达,并利用流式细胞术、外周血涂片方法鉴定T-ALL斑马鱼模型的表型.结果 在867条显微注射重组质粒的斑马鱼中,鉴定发现有20条(2.3％)转基因阳性斑马鱼,为F0代转基因斑马鱼,其中雄鱼9条,雌鱼l1条.在已性成熟的F0代成鱼之间采取一对一形式交配,产下F1代,通过荧光体视显微镜、RT-PCR、Western blotting在大体观、mRNA以及蛋白水平验证了ICN1的表达；流式细胞术和外周血涂片结果显示,转基因F1代斑马鱼与fii1-EGFP斑马鱼相比,红细胞比例显著降低,淋巴细胞比例明显增高.结论 成功构建转Notch1基因红绿双色示踪的T-ALL斑马鱼模型,为深入探讨Notch在促进T-ALL发生中的调控机制以及利用这种疾病模型进行高通量的活体药物筛选提供了研究平台.
目的 在血管內皮增彊型綠色熒光蛋白標記的斑馬魚繫(fli1-EGFP)中,轉入Rag2啟動子驅動的人源性截短型Notch1基因(ICN1),從中篩選併鑒定髮生急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)的斑馬魚,建立穩定傳代的紅綠雙色示蹤的T-ALL斑馬魚疾病模型.方法 構建Rag2-ICN1-EGFP質粒,顯微註射到斑馬魚胚胎的單細胞期,利用熒光體視顯微鏡篩選F0代,併建立穩定傳代的轉基因魚繫.通過熒光體視顯微鏡、RT-PCR 、Western blotting驗證ICN1 mRNA和蛋白的錶達,併利用流式細胞術、外週血塗片方法鑒定T-ALL斑馬魚模型的錶型.結果 在867條顯微註射重組質粒的斑馬魚中,鑒定髮現有20條(2.3％)轉基因暘性斑馬魚,為F0代轉基因斑馬魚,其中雄魚9條,雌魚l1條.在已性成熟的F0代成魚之間採取一對一形式交配,產下F1代,通過熒光體視顯微鏡、RT-PCR、Western blotting在大體觀、mRNA以及蛋白水平驗證瞭ICN1的錶達；流式細胞術和外週血塗片結果顯示,轉基因F1代斑馬魚與fii1-EGFP斑馬魚相比,紅細胞比例顯著降低,淋巴細胞比例明顯增高.結論 成功構建轉Notch1基因紅綠雙色示蹤的T-ALL斑馬魚模型,為深入探討Notch在促進T-ALL髮生中的調控機製以及利用這種疾病模型進行高通量的活體藥物篩選提供瞭研究平檯.
목적 재혈관내피증강형록색형광단백표기적반마어계(fli1-EGFP)중,전입Rag2계동자구동적인원성절단형Notch1기인(ICN1),종중사선병감정발생급성T림파세포백혈병(T-ALL)적반마어,건립은정전대적홍록쌍색시종적T-ALL반마어질병모형.방법 구건Rag2-ICN1-EGFP질립,현미주사도반마어배태적단세포기,이용형광체시현미경사선F0대,병건립은정전대적전기인어계.통과형광체시현미경、RT-PCR 、Western blotting험증ICN1 mRNA화단백적표체,병이용류식세포술、외주혈도편방법감정T-ALL반마어모형적표형.결과 재867조현미주사중조질립적반마어중,감정발현유20조(2.3％)전기인양성반마어,위F0대전기인반마어,기중웅어9조,자어l1조.재이성성숙적F0대성어지간채취일대일형식교배,산하F1대,통과형광체시현미경、RT-PCR、Western blotting재대체관、mRNA이급단백수평험증료ICN1적표체；류식세포술화외주혈도편결과현시,전기인F1대반마어여fii1-EGFP반마어상비,홍세포비례현저강저,림파세포비례명현증고.결론 성공구건전Notch1기인홍록쌍색시종적T-ALL반마어모형,위심입탐토Notch재촉진T-ALL발생중적조공궤제이급이용저충질병모형진행고통량적활체약물사선제공료연구평태.
