科技通报
科技通報
과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2013年
3期
51-57
,共7页
徐方娇%冯俊丽%梁颖%陈集双
徐方嬌%馮俊麗%樑穎%陳集雙
서방교%풍준려%량영%진집쌍
中棉41%多重PCR%检测体系
中棉41%多重PCR%檢測體繫
중면41%다중PCR%검측체계
利用多重PCR建立转基因棉花中棉41外源基因的检测体系.多重PCR技术的关键在于多重PCR反应条件的优化,本文从多重引物组合、PCR反应体系、PCR反应条件这三个方面对转基因棉花多重PCR反应进行优化,建立了扩增效率较高的中棉41的六重PCR反应体系,优化后的体系为HotstarTaq DNA聚合酶用量为1.25 U/50 μL,镁离子的终浓度为3.5 mM,dNTP的终浓度为400 μM,BSA(10mg/mL)的加入量为2μL,选取58℃为反应扩增的退火温度.利用优化的多重PCR体系特异性地检测到转基因棉花中棉41中的外源基因启动子CaMV 35S、终止子TNOS、报告基因NPTII和抗虫基因CrylAc.
利用多重PCR建立轉基因棉花中棉41外源基因的檢測體繫.多重PCR技術的關鍵在于多重PCR反應條件的優化,本文從多重引物組閤、PCR反應體繫、PCR反應條件這三箇方麵對轉基因棉花多重PCR反應進行優化,建立瞭擴增效率較高的中棉41的六重PCR反應體繫,優化後的體繫為HotstarTaq DNA聚閤酶用量為1.25 U/50 μL,鎂離子的終濃度為3.5 mM,dNTP的終濃度為400 μM,BSA(10mg/mL)的加入量為2μL,選取58℃為反應擴增的退火溫度.利用優化的多重PCR體繫特異性地檢測到轉基因棉花中棉41中的外源基因啟動子CaMV 35S、終止子TNOS、報告基因NPTII和抗蟲基因CrylAc.
이용다중PCR건립전기인면화중면41외원기인적검측체계.다중PCR기술적관건재우다중PCR반응조건적우화,본문종다중인물조합、PCR반응체계、PCR반응조건저삼개방면대전기인면화다중PCR반응진행우화,건립료확증효솔교고적중면41적륙중PCR반응체계,우화후적체계위HotstarTaq DNA취합매용량위1.25 U/50 μL,미리자적종농도위3.5 mM,dNTP적종농도위400 μM,BSA(10mg/mL)적가입량위2μL,선취58℃위반응확증적퇴화온도.이용우화적다중PCR체계특이성지검측도전기인면화중면41중적외원기인계동자CaMV 35S、종지자TNOS、보고기인NPTII화항충기인CrylAc.
