南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
1期
13-17
,共5页
王伟%殷小涛%李云奇%田仁礼%阎瑾琦%高江平%于继云
王偉%慇小濤%李雲奇%田仁禮%閻瑾琦%高江平%于繼雲
왕위%은소도%리운기%전인례%염근기%고강평%우계운
血管内皮生长因子Ⅱ型受体%1-4IgG样结构%原核表达%蛋白纯化
血管內皮生長因子Ⅱ型受體%1-4IgG樣結構%原覈錶達%蛋白純化
혈관내피생장인자Ⅱ형수체%1-4IgG양결구%원핵표체%단백순화
目的 获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体(mVEGFR2)胞外1-4IgG样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活性.方法 利用RT-PCR法从孕龄14d的Balb/c小鼠胚胎组织中扩增mVEGFR2D1-4基因,测序正确后将其克隆至原核表达载体pET-42a,构建重组质粒pET-42a-mVEGFR2D 1-4.将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,目的蛋白用Western blotting鉴定后,亲和层析法纯化融合蛋白,ELISA法检测纯化蛋白的抗原活性,并通过体外细胞培养检测该融合蛋白对血管内皮生长因子(VEGF)促人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的阻断作用.结果 测序结果证实成功扩增出目的基因mVEGFR2D1-4;酶切和测序结果证实pET-42a-mVEGFR2D 1-4原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白；Western blotting证实纯化的蛋白能与特异性抗体发生反应；ELISA检测显示纯化后的mVEGFR2D1-4融合蛋白具有免疫原性,并且体外细胞培养试验证实其能阻断VEGF对HUVEC的促增殖作用.结论 成功获得mVEGFR2D1-4/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性及生物活性,为进一步研究以VEGFR2为靶点的抗肿瘤主动免疫治疗奠定了基础.
目的 穫得小鼠血管內皮生長因子Ⅱ型受體(mVEGFR2)胞外1-4IgG樣結構域融閤蛋白併驗證其免疫原性及生物活性.方法 利用RT-PCR法從孕齡14d的Balb/c小鼠胚胎組織中擴增mVEGFR2D1-4基因,測序正確後將其剋隆至原覈錶達載體pET-42a,構建重組質粒pET-42a-mVEGFR2D 1-4.將其轉化至大腸桿菌BL21 (DE3)中IPTG誘導錶達,經SDS-PAGE分析,目的蛋白用Western blotting鑒定後,親和層析法純化融閤蛋白,ELISA法檢測純化蛋白的抗原活性,併通過體外細胞培養檢測該融閤蛋白對血管內皮生長因子(VEGF)促人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)增殖的阻斷作用.結果 測序結果證實成功擴增齣目的基因mVEGFR2D1-4;酶切和測序結果證實pET-42a-mVEGFR2D 1-4原覈錶達載體構建成功；轉化後可以成功誘導併純化齣大小與預期一緻的蛋白；Western blotting證實純化的蛋白能與特異性抗體髮生反應；ELISA檢測顯示純化後的mVEGFR2D1-4融閤蛋白具有免疫原性,併且體外細胞培養試驗證實其能阻斷VEGF對HUVEC的促增殖作用.結論 成功穫得mVEGFR2D1-4/GST融閤蛋白,該蛋白具有良好的免疫原性及生物活性,為進一步研究以VEGFR2為靶點的抗腫瘤主動免疫治療奠定瞭基礎.
목적 획득소서혈관내피생장인자Ⅱ형수체(mVEGFR2)포외1-4IgG양결구역융합단백병험증기면역원성급생물활성.방법 이용RT-PCR법종잉령14d적Balb/c소서배태조직중확증mVEGFR2D1-4기인,측서정학후장기극륭지원핵표체재체pET-42a,구건중조질립pET-42a-mVEGFR2D 1-4.장기전화지대장간균BL21 (DE3)중IPTG유도표체,경SDS-PAGE분석,목적단백용Western blotting감정후,친화층석법순화융합단백,ELISA법검측순화단백적항원활성,병통과체외세포배양검측해융합단백대혈관내피생장인자(VEGF)촉인제정맥내피세포(HUVEC)증식적조단작용.결과 측서결과증실성공확증출목적기인mVEGFR2D1-4;매절화측서결과증실pET-42a-mVEGFR2D 1-4원핵표체재체구건성공；전화후가이성공유도병순화출대소여예기일치적단백；Western blotting증실순화적단백능여특이성항체발생반응；ELISA검측현시순화후적mVEGFR2D1-4융합단백구유면역원성,병차체외세포배양시험증실기능조단VEGF대HUVEC적촉증식작용.결론 성공획득mVEGFR2D1-4/GST융합단백,해단백구유량호적면역원성급생물활성,위진일보연구이VEGFR2위파점적항종류주동면역치료전정료기출.
