器官移植
器官移植
기관이식
OGRAN TRANSPLANTATION
2013年
3期
127-135
,共9页
姜楠%李洋%胥顺%傅斌生%汪国营%李华%汪根树%张剑%杨扬%陈规划
薑楠%李洋%胥順%傅斌生%汪國營%李華%汪根樹%張劍%楊颺%陳規劃
강남%리양%서순%부빈생%왕국영%리화%왕근수%장검%양양%진규화
微阵列芯片技术%寡核苷酸序列分析%基因位点%他克莫司%细胞色素3A5%多药耐药基因
微陣列芯片技術%寡覈苷痠序列分析%基因位點%他剋莫司%細胞色素3A5%多藥耐藥基因
미진렬심편기술%과핵감산서렬분석%기인위점%타극막사%세포색소3A5%다약내약기인
目的 建立一种快速、准确的检测免疫抑制剂常见代谢相关基因多态性的微阵列芯片技术,明确肝移植供、受体细胞色素P450家族细胞色素3A5(cytochrome P450 3A5,CYP3A5)及多药耐药1(multidrug resistance 1,MDR1)基因多态性对术后患者他克莫司(FK506)浓度/剂量比(C/D)的影响.方法 选取CYP3A5和MDR1基因外显子的8个常见变异基因位点 (CYP3A5 Exon1、Exon2、Exon3、Exon13 和MDR1 Exon1、Exon12、Exon21、Exon26)设计特异性野生型、突变型引物检测探针,通过AD3200微阵列芯片点样仪点样于醛基基片上,室温保湿过夜固定.采用该基因芯片对109份肝移植供、受者全血标本进行检测,每份样本重复检测 3 次,GenePix 4100共聚焦扫描仪阅读芯片,GenePix Pro 410 芯片图像分析软件分析结果,根据同一检测位点野生型探针和突变型探针在阴阳性状态的信号值比值来确定探针的切值(cut-off值).引物探针和样本微阵列芯片检测结果与脱氧核糖核酸(DNA)测序作比对进行验证.进一步分析临床资料完整的32例肝移植患者,比较供、受体CYP3A5和MDR1基因多态性对患者FK506 C/D值的影响.结果 芯片样点分布均匀、清晰、规整度好、无漏点和连点,突变型探针和野生型探针的荧光信号强度区分明显;按照突变型探针和野生型探针的荧光强度比值设定cut-off值,结果易于判断,芯片检测结果与测序结果符合率高达99%.供体 CYP3A5基因Exon3第6986位点 A/G单核苷酸多态性 (CYP3A5*3) 与FK506 C/D值有关,术后2、4、12周供体CYP3A5*1/*1和*1/*3型患者的FK506 C/D值明显低于*3/*3型患者(均为P< 0.05),而供、受体CYP3A5其它基因型及供受体MDR1各基因型组间FK506 C/D值相比差异无统计学意义(均为P>0.05).结论 供体CYP3A5基因第6986位点携带*1等位基因的患者需更高剂量FK506才能达到目标血药浓度.CYP3A5和MDR1基因多态性的微阵列芯片技术的检测效果理想,可重复性强,为肝移植术后免疫抑制剂的个体化用药提供可靠的参考指标.
目的 建立一種快速、準確的檢測免疫抑製劑常見代謝相關基因多態性的微陣列芯片技術,明確肝移植供、受體細胞色素P450傢族細胞色素3A5(cytochrome P450 3A5,CYP3A5)及多藥耐藥1(multidrug resistance 1,MDR1)基因多態性對術後患者他剋莫司(FK506)濃度/劑量比(C/D)的影響.方法 選取CYP3A5和MDR1基因外顯子的8箇常見變異基因位點 (CYP3A5 Exon1、Exon2、Exon3、Exon13 和MDR1 Exon1、Exon12、Exon21、Exon26)設計特異性野生型、突變型引物檢測探針,通過AD3200微陣列芯片點樣儀點樣于醛基基片上,室溫保濕過夜固定.採用該基因芯片對109份肝移植供、受者全血標本進行檢測,每份樣本重複檢測 3 次,GenePix 4100共聚焦掃描儀閱讀芯片,GenePix Pro 410 芯片圖像分析軟件分析結果,根據同一檢測位點野生型探針和突變型探針在陰暘性狀態的信號值比值來確定探針的切值(cut-off值).引物探針和樣本微陣列芯片檢測結果與脫氧覈糖覈痠(DNA)測序作比對進行驗證.進一步分析臨床資料完整的32例肝移植患者,比較供、受體CYP3A5和MDR1基因多態性對患者FK506 C/D值的影響.結果 芯片樣點分佈均勻、清晰、規整度好、無漏點和連點,突變型探針和野生型探針的熒光信號彊度區分明顯;按照突變型探針和野生型探針的熒光彊度比值設定cut-off值,結果易于判斷,芯片檢測結果與測序結果符閤率高達99%.供體 CYP3A5基因Exon3第6986位點 A/G單覈苷痠多態性 (CYP3A5*3) 與FK506 C/D值有關,術後2、4、12週供體CYP3A5*1/*1和*1/*3型患者的FK506 C/D值明顯低于*3/*3型患者(均為P< 0.05),而供、受體CYP3A5其它基因型及供受體MDR1各基因型組間FK506 C/D值相比差異無統計學意義(均為P>0.05).結論 供體CYP3A5基因第6986位點攜帶*1等位基因的患者需更高劑量FK506纔能達到目標血藥濃度.CYP3A5和MDR1基因多態性的微陣列芯片技術的檢測效果理想,可重複性彊,為肝移植術後免疫抑製劑的箇體化用藥提供可靠的參攷指標.
목적 건립일충쾌속、준학적검측면역억제제상견대사상관기인다태성적미진렬심편기술,명학간이식공、수체세포색소P450가족세포색소3A5(cytochrome P450 3A5,CYP3A5)급다약내약1(multidrug resistance 1,MDR1)기인다태성대술후환자타극막사(FK506)농도/제량비(C/D)적영향.방법 선취CYP3A5화MDR1기인외현자적8개상견변이기인위점 (CYP3A5 Exon1、Exon2、Exon3、Exon13 화MDR1 Exon1、Exon12、Exon21、Exon26)설계특이성야생형、돌변형인물검측탐침,통과AD3200미진렬심편점양의점양우철기기편상,실온보습과야고정.채용해기인심편대109빈간이식공、수자전혈표본진행검측,매빈양본중복검측 3 차,GenePix 4100공취초소묘의열독심편,GenePix Pro 410 심편도상분석연건분석결과,근거동일검측위점야생형탐침화돌변형탐침재음양성상태적신호치비치래학정탐침적절치(cut-off치).인물탐침화양본미진렬심편검측결과여탈양핵당핵산(DNA)측서작비대진행험증.진일보분석림상자료완정적32례간이식환자,비교공、수체CYP3A5화MDR1기인다태성대환자FK506 C/D치적영향.결과 심편양점분포균균、청석、규정도호、무루점화련점,돌변형탐침화야생형탐침적형광신호강도구분명현;안조돌변형탐침화야생형탐침적형광강도비치설정cut-off치,결과역우판단,심편검측결과여측서결과부합솔고체99%.공체 CYP3A5기인Exon3제6986위점 A/G단핵감산다태성 (CYP3A5*3) 여FK506 C/D치유관,술후2、4、12주공체CYP3A5*1/*1화*1/*3형환자적FK506 C/D치명현저우*3/*3형환자(균위P< 0.05),이공、수체CYP3A5기타기인형급공수체MDR1각기인형조간FK506 C/D치상비차이무통계학의의(균위P>0.05).결론 공체CYP3A5기인제6986위점휴대*1등위기인적환자수경고제량FK506재능체도목표혈약농도.CYP3A5화MDR1기인다태성적미진렬심편기술적검측효과이상,가중복성강,위간이식술후면역억제제적개체화용약제공가고적삼고지표.
