CAJ | 학술논문

目的建立一种HBV复杂前C区变异株精确定量的检测系统.方法分两步实时PCR完成检测.首先应用野生株阻断探针(WT-blocker probe)进行选择性抑制野生株病毒的扩增,而含量偏低的变异株病毒得以扩增约10 000倍,使其在后续反应中易于检出;第二步应用单标记探针(SimpleProbe)结合熔解曲线分析系统精确定量检测前C区G1896A、G1899A、G1896A/G1899A变异株.通过PBPPO(primer-blocker-probe partial-overlap)设计减少基因多态性对检测的影响,来提高检测精确度.检验结果经直接测序及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法予以证实.结果 4种标准质粒(G1896/G1899、G1896A、G1899A、G1896A/G1899A)能够很好地被检出并予以区分,突变检测灵敏度达到0.01%;10例HBeAg阳性(直接测序法鉴定前C区变异阴性)患者血清标本中,每例至少1种前C区变异株被检出.结论单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析能够早期灵敏检测前C区变异株,前C区变异株进化过程及机制还需进一步大样本、纵向队列研究予以阐明.
목적 건립일충HBV복잡전C구변이주정학정량적검측계통.방법 분량보실시PCR완성검측.수선응용야생주조단탐침(WT-blocker probe)진행선택성억제야생주병독적확증,이함량편저적변이주병독득이확증약10 000배,사기재후속반응중역우검출;제이보응용단표기탐침(SimpleProbe)결합용해곡선분석계통정학정량검측전C구G1896A、G1899A、G1896A/G1899A변이주.통과PBPPO(primer-blocker-probe partial-overlap)설계감소기인다태성대검측적영향,래제고검측정학도.검험결과경직접측서급취합매련반응-한제성편단장도다태성분석방법여이증실.결과 4충표준질립(G1896/G1899、G1896A、G1899A、G1896A/G1899A)능구흔호지피검출병여이구분,돌변검측령민도체도0.01%;10례HBeAg양성(직접측서법감정전C구변이음성)환자혈청표본중,매례지소1충전C구변이주피검출.결론 단표기탐침실시형광정량PCR화용해곡선분석능구조기령민검측전C구변이주,전C구변이주진화과정급궤제환수진일보대양본、종향대렬연구여이천명.