中国现代医生
中國現代醫生
중국현대의생
CHINA MODERN DOCTOR
2012年
31期
1-3,7
,共4页
细胞周期蛋白A2%正义%反义%真核表达载体
細胞週期蛋白A2%正義%反義%真覈錶達載體
세포주기단백A2%정의%반의%진핵표체재체
目的 构建小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体.方法 采用小鼠胚胎组织取材,提取总RNA.设计引物,采用RT-PCR方法扩增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA,将此DNA插入pGEM-T载体,转化入JM109感受态细菌.将鉴定得到的重组质粒进行扩增,EcoR Ⅰ酶切后,回收cyclin A2目的片段亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体.酶切筛选鉴定重组的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2.结果 将小鼠基因的开放阅读框(ORF)重组到真核表达载体pcDNA3.1内,用EcoR Ⅰ酶切重组质粒后可得到一接近1660 bp的DNA条带,核酸测序证实和GenBank 所公布序列相符.HindⅢ酶切鉴定重组质粒后,证明分别为正向和反向插入载体的质粒.DNA测序证明构建的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正确的.结论成功构建了小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体.
目的 構建小鼠cyclin A2的正義和反義真覈錶達載體.方法 採用小鼠胚胎組織取材,提取總RNA.設計引物,採用RT-PCR方法擴增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA,將此DNA插入pGEM-T載體,轉化入JM109感受態細菌.將鑒定得到的重組質粒進行擴增,EcoR Ⅰ酶切後,迴收cyclin A2目的片段亞剋隆入pcDNA3.1真覈錶達載體.酶切篩選鑒定重組的真覈錶達載體pcDNA3.1-cyclin A2.結果 將小鼠基因的開放閱讀框(ORF)重組到真覈錶達載體pcDNA3.1內,用EcoR Ⅰ酶切重組質粒後可得到一接近1660 bp的DNA條帶,覈痠測序證實和GenBank 所公佈序列相符.HindⅢ酶切鑒定重組質粒後,證明分彆為正嚮和反嚮插入載體的質粒.DNA測序證明構建的真覈錶達載體pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正確的.結論成功構建瞭小鼠cyclin A2的正義和反義真覈錶達載體.
목적 구건소서cyclin A2적정의화반의진핵표체재체.방법 채용소서배태조직취재,제취총RNA.설계인물,채용RT-PCR방법확증소서cyclin A2 mRNA득도cyclin A2적DNA,장차DNA삽입pGEM-T재체,전화입JM109감수태세균.장감정득도적중조질립진행확증,EcoR Ⅰ매절후,회수cyclin A2목적편단아극륭입pcDNA3.1진핵표체재체.매절사선감정중조적진핵표체재체pcDNA3.1-cyclin A2.결과 장소서기인적개방열독광(ORF)중조도진핵표체재체pcDNA3.1내,용EcoR Ⅰ매절중조질립후가득도일접근1660 bp적DNA조대,핵산측서증실화GenBank 소공포서렬상부.HindⅢ매절감정중조질립후,증명분별위정향화반향삽입재체적질립.DNA측서증명구건적진핵표체재체pcDNA3.1-cyclin A2적서렬시정학적.결론성공구건료소서cyclin A2적정의화반의진핵표체재체.
