中华实用儿科临床杂志
中華實用兒科臨床雜誌
중화실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2013年
4期
281-284
,共4页
潘小晶%王锁英%许化溪%王胜军
潘小晶%王鎖英%許化溪%王勝軍
반소정%왕쇄영%허화계%왕성군
支气管哮喘%T-bet%GATA-3%Foxp3%免疫调节
支氣管哮喘%T-bet%GATA-3%Foxp3%免疫調節
지기관효천%T-bet%GATA-3%Foxp3%면역조절
Bronchial asthma%T-bet%GATA-3%Foxp3%Immunoregulation
目的 应用携带T-bet基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-T-bet)经鼻干预支气管哮喘(哮喘)小鼠模型,探讨T-bet基因传递对哮喘小鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节及改善炎症的作用.方法 采用随机数字表法将40只健康的6～8周龄SPF级Balb/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、rAAV介导的增强型绿色荧光蛋白(rAAV-eGFP)干预对照组(C组)及rAAV-T-bet干预组(D组),每组10只.B、C、D组以卵清蛋白(OVA)致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,其中C、D组在第18、19天分别经鼻滴入等剂量rAAV-eGFP、rAAV-T-bet进行干预；B组处理方法同上,以等剂量的9 g/L盐水干预.于最后一次激发24 h后处死小鼠并取材.应用免疫组织化学方法观察小鼠肺组织中转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3水平；计数BALF中细胞总数并分析其细胞类型；ELISA法测定BALF中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5表达水平.结果1.B组、C组中T-bet表达细胞的阳性率均明显低于A组(P均＜0.05),GATA-3表达细胞的阳性率明显高于A组(P均＜0.05),D组中T-bet表达明显增强,GATA-3表达则显著下降(P均＜0.05),Foxp3的表达阳性率在各组间的差异与T-bet的表达类似.2.D组BALF中细胞总数为(0.35±0.11)×109/L,其中EOS比例为0.04±0.02,虽高于A组,但明显低于B、C组(P均＜0.05)；IL-4和IL-5分别为(158±55) ng/L、(68±22) ng/L,显著低于B、C组(P均＜0.05),高于A组但差异无统计学意义(P均＞0.05),而IFL-γ水平[(113±35) ng/L]明显低于B、C组(P均＜0.05),与A组比较水平相近(P＞0.05).结论 在建立小鼠哮喘模型的基础上,经鼻应用rAAV-T-bet干预可使T-bet基因顺利定向插入到受转染细胞的基因组中,成功编码T-bet蛋白,并进一步对哮喘小鼠模型发挥相应的免疫调节作用.
目的 應用攜帶T-bet基因的重組腺相關病毒載體(rAAV-T-bet)經鼻榦預支氣管哮喘(哮喘)小鼠模型,探討T-bet基因傳遞對哮喘小鼠T淋巴細胞亞群的免疫調節及改善炎癥的作用.方法 採用隨機數字錶法將40隻健康的6～8週齡SPF級Balb/c小鼠隨機分為正常對照組(A組)、哮喘模型組(B組)、rAAV介導的增彊型綠色熒光蛋白(rAAV-eGFP)榦預對照組(C組)及rAAV-T-bet榦預組(D組),每組10隻.B、C、D組以卵清蛋白(OVA)緻敏和激髮,建立哮喘小鼠模型,其中C、D組在第18、19天分彆經鼻滴入等劑量rAAV-eGFP、rAAV-T-bet進行榦預；B組處理方法同上,以等劑量的9 g/L鹽水榦預.于最後一次激髮24 h後處死小鼠併取材.應用免疫組織化學方法觀察小鼠肺組織中轉錄因子T-bet、GATA-3和Foxp3水平；計數BALF中細胞總數併分析其細胞類型；ELISA法測定BALF中細胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5錶達水平.結果1.B組、C組中T-bet錶達細胞的暘性率均明顯低于A組(P均＜0.05),GATA-3錶達細胞的暘性率明顯高于A組(P均＜0.05),D組中T-bet錶達明顯增彊,GATA-3錶達則顯著下降(P均＜0.05),Foxp3的錶達暘性率在各組間的差異與T-bet的錶達類似.2.D組BALF中細胞總數為(0.35±0.11)×109/L,其中EOS比例為0.04±0.02,雖高于A組,但明顯低于B、C組(P均＜0.05)；IL-4和IL-5分彆為(158±55) ng/L、(68±22) ng/L,顯著低于B、C組(P均＜0.05),高于A組但差異無統計學意義(P均＞0.05),而IFL-γ水平[(113±35) ng/L]明顯低于B、C組(P均＜0.05),與A組比較水平相近(P＞0.05).結論 在建立小鼠哮喘模型的基礎上,經鼻應用rAAV-T-bet榦預可使T-bet基因順利定嚮插入到受轉染細胞的基因組中,成功編碼T-bet蛋白,併進一步對哮喘小鼠模型髮揮相應的免疫調節作用.
목적 응용휴대T-bet기인적중조선상관병독재체(rAAV-T-bet)경비간예지기관효천(효천)소서모형,탐토T-bet기인전체대효천소서T림파세포아군적면역조절급개선염증적작용.방법 채용수궤수자표법장40지건강적6～8주령SPF급Balb/c소서수궤분위정상대조조(A조)、효천모형조(B조)、rAAV개도적증강형록색형광단백(rAAV-eGFP)간예대조조(C조)급rAAV-T-bet간예조(D조),매조10지.B、C、D조이란청단백(OVA)치민화격발,건립효천소서모형,기중C、D조재제18、19천분별경비적입등제량rAAV-eGFP、rAAV-T-bet진행간예；B조처리방법동상,이등제량적9 g/L염수간예.우최후일차격발24 h후처사소서병취재.응용면역조직화학방법관찰소서폐조직중전록인자T-bet、GATA-3화Foxp3수평；계수BALF중세포총수병분석기세포류형；ELISA법측정BALF중세포인자IFN-γ、IL-4、IL-5표체수평.결과1.B조、C조중T-bet표체세포적양성솔균명현저우A조(P균＜0.05),GATA-3표체세포적양성솔명현고우A조(P균＜0.05),D조중T-bet표체명현증강,GATA-3표체칙현저하강(P균＜0.05),Foxp3적표체양성솔재각조간적차이여T-bet적표체유사.2.D조BALF중세포총수위(0.35±0.11)×109/L,기중EOS비례위0.04±0.02,수고우A조,단명현저우B、C조(P균＜0.05)；IL-4화IL-5분별위(158±55) ng/L、(68±22) ng/L,현저저우B、C조(P균＜0.05),고우A조단차이무통계학의의(P균＞0.05),이IFL-γ수평[(113±35) ng/L]명현저우B、C조(P균＜0.05),여A조비교수평상근(P＞0.05).결론 재건립소서효천모형적기출상,경비응용rAAV-T-bet간예가사T-bet기인순리정향삽입도수전염세포적기인조중,성공편마T-bet단백,병진일보대효천소서모형발휘상응적면역조절작용.
