乙肝治疗性可复制型DNA疫苗pSVK-HBVA高稳定宿主菌的筛选及其基础培养基的选择
을간치료성가복제형DNA역묘pSVK-HBVA고은정숙주균적사선급기기출배양기적선택
Screening of high stable host bacterium and selection of basic medium for self-replication HBV therapeutic DNA vaccine pSVK-HBVA
  • 万方数据
    军事医学 군사의학
    BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
    2013年 5期 363-367 ,共5页

    朱晓明%王宇%吴昊%徐元基%张巍%王琳%张亮%李盼%侯沙沙%王启宇%于继云%阎瑾琦

    주효명%왕우%오호%서원기%장외%왕림%장량%리반%후사사%왕계우%우계운%염근기

    肝炎,乙型%疫苗,DNA%高稳定性%宿主菌%XL10-Gold%基础培养基 肝炎,乙型%疫苗,DNA%高穩定性%宿主菌%XL10-Gold%基礎培養基
    간염,을형%역묘,DNA%고은정성%숙주균%XL10-Gold%기출배양기
    目的 为乙肝治疗性可复制型DNA疫苗质粒pSVK-HBVA筛选稳定性高,能多次传代的宿主菌,以满足中试工艺的要求,同时对该工程菌最适的基础发酵培养基进行选择.方法 将质粒pSVK-HBVA分别转化几种不同的大肠杆菌感受态细胞并提取质粒,通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的形态结构,连续传代法对工程菌的稳定性进行检测;选取质粒含量最高和稳定性最好的工程菌作为原始种子,按照2010版<中国药典>要求建立工程菌的三级种子批,并对种子批进行鉴定.同时,从LB,TB,M9(甘油),M9(葡萄糖)4种培养基中为工程菌筛选质粒产量最高的基础发酵培养基.结果 经过筛选发现,在以大肠杆菌XL10-Gold为宿主菌时,质粒pSVK-HBVA表现出了同常规质粒DNA类似的稳定性,转接传代30次也未发生重组或片段丢失,能满足后续中试工艺的要求,LB作为基础培养基能得到最高的质粒容积产率为5.5 mg/L.结论 大肠杆菌XL10-Gold是一个更利于可复制型DNA疫苗质粒pSVK-HBVA扩增的宿主菌,该工程菌发酵的最佳基础培养基是LB培养基.
    목적 위을간치료성가복제형DNA역묘질립pSVK-HBVA사선은정성고,능다차전대적숙주균,이만족중시공예적요구,동시대해공정균최괄적기출발효배양기진행선택.방법 장질립pSVK-HBVA분별전화궤충불동적대장간균감수태세포병제취질립,통과경지당응효전영검측질립적형태결구,련속전대법대공정균적은정성진행검측;선취질립함량최고화은정성최호적공정균작위원시충자,안조2010판<중국약전>요구건립공정균적삼급충자비,병대충자비진행감정.동시,종LB,TB,M9(감유),M9(포도당)4충배양기중위공정균사선질립산량최고적기출발효배양기.결과 경과사선발현,재이대장간균XL10-Gold위숙주균시,질립pSVK-HBVA표현출료동상규질립DNA유사적은정성,전접전대30차야미발생중조혹편단주실,능만족후속중시공예적요구,LB작위기출배양기능득도최고적질립용적산솔위5.5 mg/L.결론 대장간균XL10-Gold시일개경리우가복제형DNA역묘질립pSVK-HBVA확증적숙주균,해공정균발효적최가기출배양기시LB배양기.
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