人G250真核表达载体pIRES-neo-G250的构建及表达
인G250진핵표체재체pIRES-neo-G250적구건급표체
Construction and expression of recombinant plasmid pIRES-neo-G250 expressing human G250
  • 万方数据
    军事医学 군사의학
    BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
    2013年 5期 354-357 ,共4页

    李云奇%朱晓明%肖毅%王伟%李盼%王宇%王琳%徐元基%阎瑾琦%张巍%于继云%高江平

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    G250%真核表达%质粒%293T细胞%肾肿瘤 G250%真覈錶達%質粒%293T細胞%腎腫瘤
    G250%진핵표체%질립%293T세포%신종류
    目的 构建包含人的G250真核表达载体,并将该载体转导入293 T细胞检测其表达,为构建以G250为靶点的肾癌模型提供研究基础.方法 通过聚合酶链反应获得G250基因,将其连接至PMD18T过渡载体,然后克隆到载体pIRES-neo中.把构建后的重组质粒pIRES-neo-G250转染到293 T细胞,用流式细胞仪、免疫荧光和RT-PCR检测其表达.结果 PCR扩增出的G250基因测序正确,酶切鉴定重组质粒pIRES-neo-G250正确,说明质粒构建成功;流式细胞术、免疫荧光和RT-PCT检测结果表明,重组质粒pIRES-neo-G250在293 T细胞中得到表达.结论 该实验成功构建了重组质粒pIRES-neo-G250,并且在293T细胞中能够有效表达,为后续构建转染人G250的基因细胞株工作奠定了基础.
    목적 구건포함인적G250진핵표체재체,병장해재체전도입293 T세포검측기표체,위구건이G250위파점적신암모형제공연구기출.방법 통과취합매련반응획득G250기인,장기련접지PMD18T과도재체,연후극륭도재체pIRES-neo중.파구건후적중조질립pIRES-neo-G250전염도293 T세포,용류식세포의、면역형광화RT-PCR검측기표체.결과 PCR확증출적G250기인측서정학,매절감정중조질립pIRES-neo-G250정학,설명질립구건성공;류식세포술、면역형광화RT-PCT검측결과표명,중조질립pIRES-neo-G250재293 T세포중득도표체.결론 해실험성공구건료중조질립pIRES-neo-G250,병차재293T세포중능구유효표체,위후속구건전염인G250적기인세포주공작전정료기출.
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