CAJ | 학술논문

目的探索有效的抗体稳定性改构策略,筛选制备抗肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)稳定、高亲和力人源抗体.方法基于定点突变技术和核糖体展示技术,对人源抗体片段VH进行骆驼化稳定性改构,构建骆驼化人源单域抗体(single-domain antibodyies,sdAbs)库,以TNF-α作为筛选抗原,筛选特异骆驼化人源sdAbs.结果以前期构建的人源VH/K基因库为模板扩增VH基因;采用定点突变方法,将VH基因FR2中的4个疏水性氨基酸突变为亲水性氨基酸构建人源骆驼化sdAbs基因库;基于核糖体抗体库技术,构建用于核糖体展示的sdAbs基因库;经体外转录翻译后,以重组TNF-α作为筛选抗原,采用亲和富集法淘选特异性抗体基因;将筛选富集mRNA的RT-PCR基因产物克隆,并在原核系统pET-22b( + )/BL21(DE3)中实现可溶性表达,表达产物经ELISA鉴定,确认具有极高ELISA值的阳性克隆12、40,其序列分析表明是全新的抗TNF-α人源sdAbs;抗原特异性结合活性实验显示两者均可以特异性识别TNF-α,而不能与狂犬病毒糖蛋白和BSA结合,表明它们是特异针对TNF-α的人源基因工程抗体,而且均有很好的抗原浓度依赖性.结论该研究将抗体稳定性的定向改造法和进化方法相结合,筛选得到了具有较好抗原特异性和良好稳定性的人源抗体,为稳定性人源抗体的制备提供了理论依据及技术基础.
목적 탐색유효적항체은정성개구책략,사선제비항종류배사인자(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)은정、고친화력인원항체.방법 기우정점돌변기술화핵당체전시기술,대인원항체편단VH진행락타화은정성개구,구건락타화인원단역항체(single-domain antibodyies,sdAbs)고,이TNF-α작위사선항원,사선특이락타화인원sdAbs.결과 이전기구건적인원VH/K기인고위모판확증VH기인;채용정점돌변방법,장VH기인FR2중적4개소수성안기산돌변위친수성안기산구건인원락타화sdAbs기인고;기우핵당체항체고기술,구건용우핵당체전시적sdAbs기인고;경체외전록번역후,이중조TNF-α작위사선항원,채용친화부집법도선특이성항체기인;장사선부집mRNA적RT-PCR기인산물극륭,병재원핵계통pET-22b( + )/BL21(DE3)중실현가용성표체,표체산물경ELISA감정,학인구유겁고ELISA치적양성극륭12、40,기서렬분석표명시전신적항TNF-α인원sdAbs;항원특이성결합활성실험현시량자균가이특이성식별TNF-α,이불능여광견병독당단백화BSA결합,표명타문시특이침대TNF-α적인원기인공정항체,이차균유흔호적항원농도의뢰성.결론 해연구장항체은정성적정향개조법화진화방법상결합,사선득도료구유교호항원특이성화량호은정성적인원항체,위은정성인원항체적제비제공료이론의거급기술기출.