CAJ | 학술논문

目的研究短时间应用顺铂是否会引起宫颈癌细胞株HCE1发生上皮间质转化(EMT),明确Twist1是否为调控顺铂诱导宫颈癌细胞EMT的关键转录因子.方法采用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和免疫组织化学法分别从细胞形态、生长曲线和标志性蛋白E-cadherin、vimentin的表达情况.以HCE1细胞株为对照组,加顺铂组(终浓度0.1 mg/L)为实验组,观察加入顺铂24、48、72、96 h后,宫颈癌细胞株HCE1是否发生EMT及其时间点.采用Transwell小室实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力,免疫组织化学方法检测P糖蛋白(P-gp)蛋白表达证实EMT发生.半定量RT-PCR方法比较EMT前、后Twist1表达.结果低剂量顺铂处理HCE1 72 h后,HCE1细胞形态发生EMT的改变;上皮细胞标志性蛋白细胞黏附分子(E-cadherin)表达减少、间质细胞标志性蛋白Vimentin表达增强,P-gp蛋白表达增强;对照组HCE1平均穿膜细胞数为(39.000 0±2.828 4)个,EMT组HCE1平均穿膜细胞数为(100.166 7±3.868 7)个;RT-PCR法测得Twist1/内参OD比值在对照组0.200 2±0.000 9,EMT组0.615 6±0.005 1,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论低剂量顺铂早期即可诱导HCE1发生EMT,发生EMT的HCE1细胞体外侵袭能力和耐药性增强,Twist1是调控顺铂诱导宫颈癌细胞EMT的关键转录因子.
목적 연구단시간응용순박시부회인기궁경암세포주HCE1발생상피간질전화(EMT),명학Twist1시부위조공순박유도궁경암세포EMT적관건전록인자.방법 채용도치상차현미경、사갑기우담서염(MTT)법화면역조직화학법분별종세포형태、생장곡선화표지성단백E-cadherin、vimentin적표체정황.이HCE1세포주위대조조,가순박조(종농도0.1 mg/L)위실험조,관찰가입순박24、48、72、96 h후,궁경암세포주HCE1시부발생EMT급기시간점.채용Transwell소실실험검측종류세포체외침습능력,면역조직화학방법검측P당단백(P-gp)단백표체증실EMT발생.반정량RT-PCR방법비교EMT전、후Twist1표체.결과 저제량순박처리HCE1 72 h후,HCE1세포형태발생EMT적개변;상피세포표지성단백세포점부분자(E-cadherin)표체감소、간질세포표지성단백Vimentin표체증강,P-gp단백표체증강;대조조HCE1평균천막세포수위(39.000 0±2.828 4)개,EMT조HCE1평균천막세포수위(100.166 7±3.868 7)개;RT-PCR법측득Twist1/내삼OD비치재대조조0.200 2±0.000 9,EMT조0.615 6±0.005 1,조간비교차이유통계학의의(P＜0.05).결론 저제량순박조기즉가유도HCE1발생EMT,발생EMT적HCE1세포체외침습능력화내약성증강,Twist1시조공순박유도궁경암세포EMT적관건전록인자.