重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2013年
15期
1685-1688
,共4页
谭晓秋%程俊%程秀丽%李畅%毛亮%曾晓荣%曹济民%杨艳
譚曉鞦%程俊%程秀麗%李暢%毛亮%曾曉榮%曹濟民%楊豔
담효추%정준%정수려%리창%모량%증효영%조제민%양염
大电导钙激活钾通道%肌,平滑,血管%动力学
大電導鈣激活鉀通道%肌,平滑,血管%動力學
대전도개격활갑통도%기,평활,혈관%동역학
目的 构建稳定表达人血管平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)的293细胞系,并研究其基本电生理学特征和动力学模型.方法 通过脂质体(lipofectamine 2000)转染法转染BKCa表达质粒pcDNA3.1-BKα和(或) pIRES-BKβ1,筛选稳定表达的单克隆细胞系.使用膜片钳多种记录方式研究其基本电生理学特性,同时建立BKCa动力学研究模型.结果 构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系,通过膜片钳能够记录到具有与天然细胞BKCa电生理学特性相似的电流,包括大电导特性[内面向外式构型下单通道电导为(216.38±3.55)pS]、电压依赖性、Ca2+依赖性、钾离子选择性和200 nmol/L IbTX(BKCa特异性阻断剂)阻断;联合表达β1亚单位能够明显增加通道的开放时程.采用inside-out宏观电流记录方式可以记录到明显的尾电流.可以用于分析通道激活、去激活等动力学模型及药物动力学作用机制.结论 成功构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系.膜片钳实验证明具有典型的BKCa电生理学特性,同时建立的细胞系可以很好的用于BKCa通道功能调控研究和动力学参数分析.
目的 構建穩定錶達人血管平滑肌大電導鈣激活鉀通道(BKCa)的293細胞繫,併研究其基本電生理學特徵和動力學模型.方法 通過脂質體(lipofectamine 2000)轉染法轉染BKCa錶達質粒pcDNA3.1-BKα和(或) pIRES-BKβ1,篩選穩定錶達的單剋隆細胞繫.使用膜片鉗多種記錄方式研究其基本電生理學特性,同時建立BKCa動力學研究模型.結果 構建穩定轉染BKCa通道α和(或)β1亞單位的HEK293細胞繫,通過膜片鉗能夠記錄到具有與天然細胞BKCa電生理學特性相似的電流,包括大電導特性[內麵嚮外式構型下單通道電導為(216.38±3.55)pS]、電壓依賴性、Ca2+依賴性、鉀離子選擇性和200 nmol/L IbTX(BKCa特異性阻斷劑)阻斷;聯閤錶達β1亞單位能夠明顯增加通道的開放時程.採用inside-out宏觀電流記錄方式可以記錄到明顯的尾電流.可以用于分析通道激活、去激活等動力學模型及藥物動力學作用機製.結論 成功構建穩定轉染BKCa通道α和(或)β1亞單位的HEK293細胞繫.膜片鉗實驗證明具有典型的BKCa電生理學特性,同時建立的細胞繫可以很好的用于BKCa通道功能調控研究和動力學參數分析.
목적 구건은정표체인혈관평활기대전도개격활갑통도(BKCa)적293세포계,병연구기기본전생이학특정화동역학모형.방법 통과지질체(lipofectamine 2000)전염법전염BKCa표체질립pcDNA3.1-BKα화(혹) pIRES-BKβ1,사선은정표체적단극륭세포계.사용막편겸다충기록방식연구기기본전생이학특성,동시건립BKCa동역학연구모형.결과 구건은정전염BKCa통도α화(혹)β1아단위적HEK293세포계,통과막편겸능구기록도구유여천연세포BKCa전생이학특성상사적전류,포괄대전도특성[내면향외식구형하단통도전도위(216.38±3.55)pS]、전압의뢰성、Ca2+의뢰성、갑리자선택성화200 nmol/L IbTX(BKCa특이성조단제)조단;연합표체β1아단위능구명현증가통도적개방시정.채용inside-out굉관전류기록방식가이기록도명현적미전류.가이용우분석통도격활、거격활등동역학모형급약물동역학작용궤제.결론 성공구건은정전염BKCa통도α화(혹)β1아단위적HEK293세포계.막편겸실험증명구유전형적BKCa전생이학특성,동시건립적세포계가이흔호적용우BKCa통도공능조공연구화동역학삼수분석.
