郑州轻工业学院学报（自然科学版）
鄭州輕工業學院學報（自然科學版）
정주경공업학원학보（자연과학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU INSTITUTE OF LIGHT INDUSTRY(NATURAL SCIENCE)
2013年
2期
59-63
,共5页
马林%王广超%罗昭标%寇晓腾%张文龙
馬林%王廣超%囉昭標%寇曉騰%張文龍
마림%왕엄초%라소표%구효등%장문룡
烤后烟叶%基因组DNA%DNA提取%PCR
烤後煙葉%基因組DNA%DNA提取%PCR
고후연협%기인조DNA%DNA제취%PCR
为解决烤后烟叶基因组DNA提取稳定性差的问题,以烤后烟叶为材料,对CTAB法提取基因组DNA进一步改良优化:对CTAB沉淀缓冲液使用量、裂解时间、Tris平衡酚的处理次数和RNase处理时间4个影响因素进行单因素优化.实验结果表明:CTAB沉淀缓冲液使用DNA溶液体积的1.5倍、裂解时间40 min、Tris平衡酚抽提1次和RNase(10 mg/mL,1μL)处理10 min,能得到主带清晰的烤后烟叶基因组DNA.该方法提取得到的烤后烟叶基因组DNA OD260/ OD280为1.7 ～1.9,OD260/OD230＞ 2.0,35 ng左右基因组DNA即能得到清晰的RAPD和SCAR图谱,适用于以PCR为基础的分子生物学实验.
為解決烤後煙葉基因組DNA提取穩定性差的問題,以烤後煙葉為材料,對CTAB法提取基因組DNA進一步改良優化:對CTAB沉澱緩遲液使用量、裂解時間、Tris平衡酚的處理次數和RNase處理時間4箇影響因素進行單因素優化.實驗結果錶明:CTAB沉澱緩遲液使用DNA溶液體積的1.5倍、裂解時間40 min、Tris平衡酚抽提1次和RNase(10 mg/mL,1μL)處理10 min,能得到主帶清晰的烤後煙葉基因組DNA.該方法提取得到的烤後煙葉基因組DNA OD260/ OD280為1.7 ～1.9,OD260/OD230＞ 2.0,35 ng左右基因組DNA即能得到清晰的RAPD和SCAR圖譜,適用于以PCR為基礎的分子生物學實驗.
위해결고후연협기인조DNA제취은정성차적문제,이고후연협위재료,대CTAB법제취기인조DNA진일보개량우화:대CTAB침정완충액사용량、렬해시간、Tris평형분적처리차수화RNase처리시간4개영향인소진행단인소우화.실험결과표명:CTAB침정완충액사용DNA용액체적적1.5배、렬해시간40 min、Tris평형분추제1차화RNase(10 mg/mL,1μL)처리10 min,능득도주대청석적고후연협기인조DNA.해방법제취득도적고후연협기인조DNA OD260/ OD280위1.7 ～1.9,OD260/OD230＞ 2.0,35 ng좌우기인조DNA즉능득도청석적RAPD화SCAR도보,괄용우이PCR위기출적분자생물학실험.
