生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2013年
2期
136-142
,共7页
孔祥军%申镇维%陈虎%赵连利%于庆杰%姬春雪%李宝辉%吴蕊
孔祥軍%申鎮維%陳虎%趙連利%于慶傑%姬春雪%李寶輝%吳蕊
공상군%신진유%진호%조련리%우경걸%희춘설%리보휘%오예
多重RT-PCR%肠道病毒%乙脑病毒%腮腺炎病毒%病毒性脑炎
多重RT-PCR%腸道病毒%乙腦病毒%腮腺炎病毒%病毒性腦炎
다중RT-PCR%장도병독%을뇌병독%시선염병독%병독성뇌염
为建立针对肠道病毒(enterovirus,EV)、乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和腮腺炎病毒(mumps virus,MUV)的多重RT-PCR检测方法,分别选择肠道病毒的5 'UTR基因、乙脑病毒的E基因和腮腺炎病毒M基因设计3对引物,建立同时检测肠道病毒、乙脑病毒和腮腺炎病毒的多重RT-PCR方法.以中国地区流行的与脑炎相关的麻疹病毒和风疹病毒cDNA为模板验证该检测方法的特异性,同时以梯度稀释的不同滴度的脊髓灰质炎病毒、乙脑病毒、腮腺炎病毒评估该检测方法的检出限.所建立的3种病毒的多重RT-PCR方法可同时或分别特异扩增肠道病毒、乙脑病毒和腮腺炎病毒的152 bp、429 bp和274 bp基因片段,基因序列分别与脊髓灰质炎病毒Sabin 1型5'UTR基因片段、乙型脑炎病毒SA-14-14-2株E基因片段及腮腺炎病毒S79基因片段序列一致;检出限分别达到78.1 CCID50/mL、312.5 PFU/mL、156.2 CCID50/mL;而对麻疹病毒和风疹病毒的扩增均为阴性.所建立的多重RT-PCR特异性和检出限良好,可用于上述3种脑炎病毒的快速检测.
為建立針對腸道病毒(enterovirus,EV)、乙腦病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和腮腺炎病毒(mumps virus,MUV)的多重RT-PCR檢測方法,分彆選擇腸道病毒的5 'UTR基因、乙腦病毒的E基因和腮腺炎病毒M基因設計3對引物,建立同時檢測腸道病毒、乙腦病毒和腮腺炎病毒的多重RT-PCR方法.以中國地區流行的與腦炎相關的痳疹病毒和風疹病毒cDNA為模闆驗證該檢測方法的特異性,同時以梯度稀釋的不同滴度的脊髓灰質炎病毒、乙腦病毒、腮腺炎病毒評估該檢測方法的檢齣限.所建立的3種病毒的多重RT-PCR方法可同時或分彆特異擴增腸道病毒、乙腦病毒和腮腺炎病毒的152 bp、429 bp和274 bp基因片段,基因序列分彆與脊髓灰質炎病毒Sabin 1型5'UTR基因片段、乙型腦炎病毒SA-14-14-2株E基因片段及腮腺炎病毒S79基因片段序列一緻;檢齣限分彆達到78.1 CCID50/mL、312.5 PFU/mL、156.2 CCID50/mL;而對痳疹病毒和風疹病毒的擴增均為陰性.所建立的多重RT-PCR特異性和檢齣限良好,可用于上述3種腦炎病毒的快速檢測.
위건립침대장도병독(enterovirus,EV)、을뇌병독(Japanese encephalitis virus,JEV)화시선염병독(mumps virus,MUV)적다중RT-PCR검측방법,분별선택장도병독적5 'UTR기인、을뇌병독적E기인화시선염병독M기인설계3대인물,건립동시검측장도병독、을뇌병독화시선염병독적다중RT-PCR방법.이중국지구류행적여뇌염상관적마진병독화풍진병독cDNA위모판험증해검측방법적특이성,동시이제도희석적불동적도적척수회질염병독、을뇌병독、시선염병독평고해검측방법적검출한.소건립적3충병독적다중RT-PCR방법가동시혹분별특이확증장도병독、을뇌병독화시선염병독적152 bp、429 bp화274 bp기인편단,기인서렬분별여척수회질염병독Sabin 1형5'UTR기인편단、을형뇌염병독SA-14-14-2주E기인편단급시선염병독S79기인편단서렬일치;검출한분별체도78.1 CCID50/mL、312.5 PFU/mL、156.2 CCID50/mL;이대마진병독화풍진병독적확증균위음성.소건립적다중RT-PCR특이성화검출한량호,가용우상술3충뇌염병독적쾌속검측.
