生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2013年
2期
111-115
,共5页
邓梅春%罗旋%陈汉春%王军%梁宋平
鄧梅春%囉鏇%陳漢春%王軍%樑宋平
산매춘%라선%진한춘%왕군%량송평
虎纹毒素-Ⅳ(HWTX-Ⅳ)%突变体%固相多肽合成%氧化复性%钠通道
虎紋毒素-Ⅳ(HWTX-Ⅳ)%突變體%固相多肽閤成%氧化複性%鈉通道
호문독소-Ⅳ(HWTX-Ⅳ)%돌변체%고상다태합성%양화복성%납통도
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅳ (HWTX-Ⅳ)是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离纯化到的一种新型多肽类神经毒素,能明显抑制表达于大鼠背根神经节细胞的河豚毒素敏感型(TTX-s)钠通道.为了更好地研究该毒素的结构与功能之 间的关系,采用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成法合成了用谷氨酸(Glu)替代HWTX-Ⅳ第28位苏氨酸残基的突变体T28D-HWTX-Ⅳ,线性多肽合成产物经反相高效液相色谱(HPLC)分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物采用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)技术鉴定分子质量,通过全细胞膜片钳电生理技术测定其电压门控钠通道药理学活性.当第28位Thr残基被Glu取代后,突变体T28D-HWTX-Ⅳ对表达于大鼠DRG细胞膜上的TTX-S钠通道的IC50值约为362 nmol/L,对TTX-S钠通道的抑制活性比天然HWTX-Ⅳ(IC50值=30 nmol/L)下降了约12倍,显示第28位的Thr残基是HWTX-Ⅳ与TTX-S型钠通道相互作用的关键活性残基.目前的研究为进一步探索HWTX-Ⅳ的结构与功能关系及新型镇痛药物的研发奠定了基础.
虎紋捕鳥蛛毒素-Ⅳ (HWTX-Ⅳ)是從虎紋捕鳥蛛粗毒中分離純化到的一種新型多肽類神經毒素,能明顯抑製錶達于大鼠揹根神經節細胞的河豚毒素敏感型(TTX-s)鈉通道.為瞭更好地研究該毒素的結構與功能之 間的關繫,採用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化學閤成法閤成瞭用穀氨痠(Glu)替代HWTX-Ⅳ第28位囌氨痠殘基的突變體T28D-HWTX-Ⅳ,線性多肽閤成產物經反相高效液相色譜(HPLC)分離純化後進行穀胱甘肽氧化複性.複性產物採用基質輔助激光解析飛行時間質譜(MALDI-TOF/TOF MS)技術鑒定分子質量,通過全細胞膜片鉗電生理技術測定其電壓門控鈉通道藥理學活性.噹第28位Thr殘基被Glu取代後,突變體T28D-HWTX-Ⅳ對錶達于大鼠DRG細胞膜上的TTX-S鈉通道的IC50值約為362 nmol/L,對TTX-S鈉通道的抑製活性比天然HWTX-Ⅳ(IC50值=30 nmol/L)下降瞭約12倍,顯示第28位的Thr殘基是HWTX-Ⅳ與TTX-S型鈉通道相互作用的關鍵活性殘基.目前的研究為進一步探索HWTX-Ⅳ的結構與功能關繫及新型鎮痛藥物的研髮奠定瞭基礎.
호문포조주독소-Ⅳ (HWTX-Ⅳ)시종호문포조주조독중분리순화도적일충신형다태류신경독소,능명현억제표체우대서배근신경절세포적하돈독소민감형(TTX-s)납통도.위료경호지연구해독소적결구여공능지 간적관계,채용물갑양탄기(Fmoc)고상다태화학합성법합성료용곡안산(Glu)체대HWTX-Ⅳ제28위소안산잔기적돌변체T28D-HWTX-Ⅳ,선성다태합성산물경반상고효액상색보(HPLC)분리순화후진행곡광감태양화복성.복성산물채용기질보조격광해석비행시간질보(MALDI-TOF/TOF MS)기술감정분자질량,통과전세포막편겸전생리기술측정기전압문공납통도약이학활성.당제28위Thr잔기피Glu취대후,돌변체T28D-HWTX-Ⅳ대표체우대서DRG세포막상적TTX-S납통도적IC50치약위362 nmol/L,대TTX-S납통도적억제활성비천연HWTX-Ⅳ(IC50치=30 nmol/L)하강료약12배,현시제28위적Thr잔기시HWTX-Ⅳ여TTX-S형납통도상호작용적관건활성잔기.목전적연구위진일보탐색HWTX-Ⅳ적결구여공능관계급신형진통약물적연발전정료기출.
