肝胆外科杂志
肝膽外科雜誌
간담외과잡지
JOURNAL OF HEPATOBILIARY SURGERY
2013年
2期
137-140
,共4页
真核表达载体%ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞%ABCG2
真覈錶達載體%ABCG2陰性SMMC7721肝癌細胞%ABCG2
진핵표체재체%ABCG2음성SMMC7721간암세포%ABCG2
目的 构建人的ABCG2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2,并在ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中表达.方法 以人的癌细胞为材料提取RNA,经反转录得到cDNA,利用PCR方法,根据人ABCG2基因62526032(NM_004827.2)序列信息设计引物,扩增ABCG2基因的CDS序列,将其克隆到pcDNA3.1+表达载体中.酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中.采用Western blot法检测外源基因ABCG2的表达.结果 PCR扩增片段大小与理论片段大小相符,酶切大小与理论大小相符,阳性的克隆测序鉴定正确,表明人ABCG2基因克隆及真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2构建成功.在蛋白水平,转染72h后的细胞中外源基因ABCG2表达均明显增加.结论 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2,并在ABCG2阴性SMMC7721肝癌细胞中进行了表达.
目的 構建人的ABCG2基因真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-ABCG2,併在ABCG2陰性SMMC7721肝癌細胞中錶達.方法 以人的癌細胞為材料提取RNA,經反轉錄得到cDNA,利用PCR方法,根據人ABCG2基因62526032(NM_004827.2)序列信息設計引物,擴增ABCG2基因的CDS序列,將其剋隆到pcDNA3.1+錶達載體中.酶切及測序鑒定重組質粒正確後,脂質體介導轉染至ABCG2陰性SMMC7721肝癌細胞中.採用Western blot法檢測外源基因ABCG2的錶達.結果 PCR擴增片段大小與理論片段大小相符,酶切大小與理論大小相符,暘性的剋隆測序鑒定正確,錶明人ABCG2基因剋隆及真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-ABCG2構建成功.在蛋白水平,轉染72h後的細胞中外源基因ABCG2錶達均明顯增加.結論 成功構建重組真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-ABCG2,併在ABCG2陰性SMMC7721肝癌細胞中進行瞭錶達.
목적 구건인적ABCG2기인진핵표체재체pcDNA3.1(+)-ABCG2,병재ABCG2음성SMMC7721간암세포중표체.방법 이인적암세포위재료제취RNA,경반전록득도cDNA,이용PCR방법,근거인ABCG2기인62526032(NM_004827.2)서렬신식설계인물,확증ABCG2기인적CDS서렬,장기극륭도pcDNA3.1+표체재체중.매절급측서감정중조질립정학후,지질체개도전염지ABCG2음성SMMC7721간암세포중.채용Western blot법검측외원기인ABCG2적표체.결과 PCR확증편단대소여이론편단대소상부,매절대소여이론대소상부,양성적극륭측서감정정학,표명인ABCG2기인극륭급진핵표체재체pcDNA3.1(+)-ABCG2구건성공.재단백수평,전염72h후적세포중외원기인ABCG2표체균명현증가.결론 성공구건중조진핵표체재체pcDNA3.1(+)-ABCG2,병재ABCG2음성SMMC7721간암세포중진행료표체.
