中华普外科手术学杂志（电子版）
中華普外科手術學雜誌（電子版）
중화보외과수술학잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF OPERATIVE PROCEDURES OF GENERAL SURGERY(ELECTRONIC VERSION)
2012年
3期
274-280
,共7页
方诚%双剑博%祁胜宾%韩亚楠%王飞%赵占伟%杜建军
方誠%雙劍博%祁勝賓%韓亞楠%王飛%趙佔偉%杜建軍
방성%쌍검박%기성빈%한아남%왕비%조점위%두건군
遗传载体%细胞系%肿瘤%点突变%转染
遺傳載體%細胞繫%腫瘤%點突變%轉染
유전재체%세포계%종류%점돌변%전염
目的 构建GDDR位点突变载体,使GDDR翻译蛋白无法通过二硫键与TFF1结合,建立稳定转染GDDR位点突变载体的人胃癌SGC-7901稳转细胞系.方法 设计GDDR Cys38位点突变引物,构建GDDR位点突变的真核表达载体;脂质体法转染重组质粒至人胃癌细胞系SGC-7901;G418筛选阳性细胞并扩大培养;实时定量 PCR检测突变GDDR mRNA在人胃癌细胞系SGC-7901的表达.结果 经限制性内切酶酶切和DNA测序证实质粒中插入的为所需序列; 实时定量 PCR证实突变GDDR在人胃癌SGC-7901稳转细胞系高表达.结论 GDDR定点突变载体构建成功,建立了稳定转染GDDR位点突变载体的SGC-7901细胞系,为进一步研究GDDR的结构和功能提供了条件.
目的 構建GDDR位點突變載體,使GDDR翻譯蛋白無法通過二硫鍵與TFF1結閤,建立穩定轉染GDDR位點突變載體的人胃癌SGC-7901穩轉細胞繫.方法 設計GDDR Cys38位點突變引物,構建GDDR位點突變的真覈錶達載體;脂質體法轉染重組質粒至人胃癌細胞繫SGC-7901;G418篩選暘性細胞併擴大培養;實時定量 PCR檢測突變GDDR mRNA在人胃癌細胞繫SGC-7901的錶達.結果 經限製性內切酶酶切和DNA測序證實質粒中插入的為所需序列; 實時定量 PCR證實突變GDDR在人胃癌SGC-7901穩轉細胞繫高錶達.結論 GDDR定點突變載體構建成功,建立瞭穩定轉染GDDR位點突變載體的SGC-7901細胞繫,為進一步研究GDDR的結構和功能提供瞭條件.
목적 구건GDDR위점돌변재체,사GDDR번역단백무법통과이류건여TFF1결합,건립은정전염GDDR위점돌변재체적인위암SGC-7901은전세포계.방법 설계GDDR Cys38위점돌변인물,구건GDDR위점돌변적진핵표체재체;지질체법전염중조질립지인위암세포계SGC-7901;G418사선양성세포병확대배양;실시정량 PCR검측돌변GDDR mRNA재인위암세포계SGC-7901적표체.결과 경한제성내절매매절화DNA측서증실질립중삽입적위소수서렬; 실시정량 PCR증실돌변GDDR재인위암SGC-7901은전세포계고표체.결론 GDDR정점돌변재체구건성공,건립료은정전염GDDR위점돌변재체적SGC-7901세포계,위진일보연구GDDR적결구화공능제공료조건.
