现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2012年
6期
57-60
,共4页
林玲%冯惊涛%姜习新%付蓉%周花%胡道奇
林玲%馮驚濤%薑習新%付蓉%週花%鬍道奇
림령%풍량도%강습신%부용%주화%호도기
丙型肝炎病毒%重组%表达%抗原性
丙型肝炎病毒%重組%錶達%抗原性
병형간염병독%중조%표체%항원성
目的 重组HCV核心区和NS4区抗原,并原核表达该蛋白作为第四代HCV抗体检测试剂的补充抗原.方法 用BioSun3.0软件分析HCV核心区和NS4区的抗原表位,选择具有优势抗原表位的3段多肽;然后用该3段多肽对应的基因设计合成引物,并采用RT-PCR和重叠延伸PCR技术扩增和拼接该3段基因;将拼接好的基因插入到原核表达载体pBVIL中,转化大肠埃希氏菌Top10进行温度诱导表达;对表达的蛋白先后进行DEAE柱和分子筛柱纯化,复性后用间接ELISA法分析该蛋白的免疫活性和作为补充抗原的可能性.结果 通过RT-PCR和重叠延伸PCR技术获得了嵌合基因C-NS4;用该基因构建的原核表达载体能表达融合蛋白C-NS4;融合蛋白C-NS4经纯化后纯度良好,经复性后具有良好的HCV抗原性;并且用该蛋白包被酶联板,可以检测到现有第四代HCV抗体检测试剂漏检的样本.结论 成功地重组了HCV核心区和NS4区抗原,原核表达了可以作为第四代HCV抗体检测试剂补充抗原的融合蛋白C-NS4.
目的 重組HCV覈心區和NS4區抗原,併原覈錶達該蛋白作為第四代HCV抗體檢測試劑的補充抗原.方法 用BioSun3.0軟件分析HCV覈心區和NS4區的抗原錶位,選擇具有優勢抗原錶位的3段多肽;然後用該3段多肽對應的基因設計閤成引物,併採用RT-PCR和重疊延伸PCR技術擴增和拼接該3段基因;將拼接好的基因插入到原覈錶達載體pBVIL中,轉化大腸埃希氏菌Top10進行溫度誘導錶達;對錶達的蛋白先後進行DEAE柱和分子篩柱純化,複性後用間接ELISA法分析該蛋白的免疫活性和作為補充抗原的可能性.結果 通過RT-PCR和重疊延伸PCR技術穫得瞭嵌閤基因C-NS4;用該基因構建的原覈錶達載體能錶達融閤蛋白C-NS4;融閤蛋白C-NS4經純化後純度良好,經複性後具有良好的HCV抗原性;併且用該蛋白包被酶聯闆,可以檢測到現有第四代HCV抗體檢測試劑漏檢的樣本.結論 成功地重組瞭HCV覈心區和NS4區抗原,原覈錶達瞭可以作為第四代HCV抗體檢測試劑補充抗原的融閤蛋白C-NS4.
목적 중조HCV핵심구화NS4구항원,병원핵표체해단백작위제사대HCV항체검측시제적보충항원.방법 용BioSun3.0연건분석HCV핵심구화NS4구적항원표위,선택구유우세항원표위적3단다태;연후용해3단다태대응적기인설계합성인물,병채용RT-PCR화중첩연신PCR기술확증화병접해3단기인;장병접호적기인삽입도원핵표체재체pBVIL중,전화대장애희씨균Top10진행온도유도표체;대표체적단백선후진행DEAE주화분자사주순화,복성후용간접ELISA법분석해단백적면역활성화작위보충항원적가능성.결과 통과RT-PCR화중첩연신PCR기술획득료감합기인C-NS4;용해기인구건적원핵표체재체능표체융합단백C-NS4;융합단백C-NS4경순화후순도량호,경복성후구유량호적HCV항원성;병차용해단백포피매련판,가이검측도현유제사대HCV항체검측시제루검적양본.결론 성공지중조료HCV핵심구화NS4구항원,원핵표체료가이작위제사대HCV항체검측시제보충항원적융합단백C-NS4.
