中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2012年
12期
2193-2196
,共4页
金玉芬%李艳蕾%华艳%张晓刚%于庭
金玉芬%李豔蕾%華豔%張曉剛%于庭
금옥분%리염뢰%화염%장효강%우정
巨细胞病毒%pp150-pp65%巨细胞IgG/IgM抗体联合检测试剂盒%胶体金法
巨細胞病毒%pp150-pp65%巨細胞IgG/IgM抗體聯閤檢測試劑盒%膠體金法
거세포병독%pp150-pp65%거세포IgG/IgM항체연합검측시제합%효체금법
目的 构建并表达人巨细胞病毒(HCMV)pp150-pp65蛋白,将纯化的重组蛋白制备成胶体金试剂盒对其抗原性进行评价.方法 采用PCR方法扩增HCMV pp150-pp65基因片段,连接到原核表达载体pET28a进行表达并纯化,采用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并与北京英诺特生物技术有限公司合作研制出巨细胞IgG/IgM抗体联合检测试剂盒(胶体金法),与进口试剂盒(酶免法)进行临床标本比对试验.结果 成功构建了HCMV的高效表达载体pET28a-pp150-pp65,并得到分子量在45 kd的高表达蛋白,具有良好的抗原性.将该蛋白制备成胶体金试剂盒,经600份血清标本的检测,与进口CMV-IgG试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为92.7%和83.1%,总的符合率为90.2%;与进口CMV-IgM试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为88.1%和89.2%,总的符合率为88.5%,稳定性良好.结论 高效表达纯化的pp150-pp65重组蛋白抗原性强,利用其建立的胶体金试剂盒与国产已上市试剂盒和进口试剂盒比对,不仅具有较高的灵敏度和特异性,而且经初步临床应用,表明该试剂盒能检测不同临床感染阶段的患者,具有较好的市场前景.
目的 構建併錶達人巨細胞病毒(HCMV)pp150-pp65蛋白,將純化的重組蛋白製備成膠體金試劑盒對其抗原性進行評價.方法 採用PCR方法擴增HCMV pp150-pp65基因片段,連接到原覈錶達載體pET28a進行錶達併純化,採用SDS-PAGE和Western blot進行鑒定,併與北京英諾特生物技術有限公司閤作研製齣巨細胞IgG/IgM抗體聯閤檢測試劑盒(膠體金法),與進口試劑盒(酶免法)進行臨床標本比對試驗.結果 成功構建瞭HCMV的高效錶達載體pET28a-pp150-pp65,併得到分子量在45 kd的高錶達蛋白,具有良好的抗原性.將該蛋白製備成膠體金試劑盒,經600份血清標本的檢測,與進口CMV-IgG試劑盒進行比對,本試劑盒的暘性符閤率和陰性符閤率分彆為92.7%和83.1%,總的符閤率為90.2%;與進口CMV-IgM試劑盒進行比對,本試劑盒的暘性符閤率和陰性符閤率分彆為88.1%和89.2%,總的符閤率為88.5%,穩定性良好.結論 高效錶達純化的pp150-pp65重組蛋白抗原性彊,利用其建立的膠體金試劑盒與國產已上市試劑盒和進口試劑盒比對,不僅具有較高的靈敏度和特異性,而且經初步臨床應用,錶明該試劑盒能檢測不同臨床感染階段的患者,具有較好的市場前景.
목적 구건병표체인거세포병독(HCMV)pp150-pp65단백,장순화적중조단백제비성효체금시제합대기항원성진행평개.방법 채용PCR방법확증HCMV pp150-pp65기인편단,련접도원핵표체재체pET28a진행표체병순화,채용SDS-PAGE화Western blot진행감정,병여북경영낙특생물기술유한공사합작연제출거세포IgG/IgM항체연합검측시제합(효체금법),여진구시제합(매면법)진행림상표본비대시험.결과 성공구건료HCMV적고효표체재체pET28a-pp150-pp65,병득도분자량재45 kd적고표체단백,구유량호적항원성.장해단백제비성효체금시제합,경600빈혈청표본적검측,여진구CMV-IgG시제합진행비대,본시제합적양성부합솔화음성부합솔분별위92.7%화83.1%,총적부합솔위90.2%;여진구CMV-IgM시제합진행비대,본시제합적양성부합솔화음성부합솔분별위88.1%화89.2%,총적부합솔위88.5%,은정성량호.결론 고효표체순화적pp150-pp65중조단백항원성강,이용기건립적효체금시제합여국산이상시시제합화진구시제합비대,불부구유교고적령민도화특이성,이차경초보림상응용,표명해시제합능검측불동림상감염계단적환자,구유교호적시장전경.
