北京化工大学学报（自然科学版）
北京化工大學學報（自然科學版）
북경화공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF BEIJING UNIVERSITY OF CHEMICAL TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2013年
3期
75-78
,共4页
黄志兵%宋嘉宁%刘珞%谭天伟
黃誌兵%宋嘉寧%劉珞%譚天偉
황지병%송가저%류락%담천위
丙烯酸%丙烯酰CoA合成酶基因%3-羟基丙酸%大肠杆菌
丙烯痠%丙烯酰CoA閤成酶基因%3-羥基丙痠%大腸桿菌
병희산%병희선CoA합성매기인%3-간기병산%대장간균
以橙色绿屈挠菌(Chloroflexus aurantiacus)dsm636基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增并克隆了丙烯酰CoA合成酶(ACS)基因,并连接到表达载体pET-22b(+)质粒上,构建了pET-22b(+)-Acs重组质粒,测序结果100％正确.将重组质粒pET-22b(+)-Acs转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,通过氨苄霉素抗性平板筛选,构建了大肠杆菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-Acs基因工程菌.重组菌株经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,目标条带出现在分子量约160000处,表明丙烯酰CoA合成酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达；体外酶活实验证明,所表达的丙烯酰CoA合成酶是具有活性的.
以橙色綠屈撓菌(Chloroflexus aurantiacus)dsm636基因組DNA為模闆,應用PCR技術擴增併剋隆瞭丙烯酰CoA閤成酶(ACS)基因,併連接到錶達載體pET-22b(+)質粒上,構建瞭pET-22b(+)-Acs重組質粒,測序結果100％正確.將重組質粒pET-22b(+)-Acs轉化到大腸桿菌錶達菌株BL21(DE3)中,通過氨芐黴素抗性平闆篩選,構建瞭大腸桿菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-Acs基因工程菌.重組菌株經異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,SDS-PAGE電泳分析,目標條帶齣現在分子量約160000處,錶明丙烯酰CoA閤成酶基因在大腸桿菌BL21(DE3)中成功錶達；體外酶活實驗證明,所錶達的丙烯酰CoA閤成酶是具有活性的.
이등색록굴뇨균(Chloroflexus aurantiacus)dsm636기인조DNA위모판,응용PCR기술확증병극륭료병희선CoA합성매(ACS)기인,병련접도표체재체pET-22b(+)질립상,구건료pET-22b(+)-Acs중조질립,측서결과100％정학.장중조질립pET-22b(+)-Acs전화도대장간균표체균주BL21(DE3)중,통과안변매소항성평판사선,구건료대장간균BL21(DE3)-pET-22b(+)-Acs기인공정균.중조균주경이병기-β-D-류대필남반유당감(IPTG)유도표체,SDS-PAGE전영분석,목표조대출현재분자량약160000처,표명병희선CoA합성매기인재대장간균BL21(DE3)중성공표체；체외매활실험증명,소표체적병희선CoA합성매시구유활성적.
