国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
7期
782-783
,共2页
林雅宁%董智聪%占景华%徐忠玉
林雅寧%董智聰%佔景華%徐忠玉
림아저%동지총%점경화%서충옥
分枝杆菌属%基因%聚合酶链反应
分枝桿菌屬%基因%聚閤酶鏈反應
분지간균속%기인%취합매련반응
目的 构建耻垢分枝杆菌末端结合蛋白Ku原核表达载体,并进行表达纯化及酶学测定.方法 以耻垢分枝杆菌str.MC2 155基因组DNA为模板,PCR法扩增ku基因,构建pQE-30-ku重组质粒,在表达宿主菌E.coli M15中诱导表达蛋白,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,最后通过凝胶迁移电泳实验测定Ku蛋白与5'粘末端、3'粘末端和平末端3种不同末端DNA结合情况.结果 成功构建了ku原核表达载体pQE-30-ku,并能在宿主菌E.coli M15中表达,纯化后具有结合不同末端DNA的酶活性.结论 Ku基因克隆到原核宿主菌中能进行表达、纯化,纯化后的蛋白具有结合不同末端DNA的生物学活性,为分枝杆菌非同源末端连接的研究奠定了基础.
目的 構建恥垢分枝桿菌末耑結閤蛋白Ku原覈錶達載體,併進行錶達純化及酶學測定.方法 以恥垢分枝桿菌str.MC2 155基因組DNA為模闆,PCR法擴增ku基因,構建pQE-30-ku重組質粒,在錶達宿主菌E.coli M15中誘導錶達蛋白,Ni2+-NTA親和層析柱純化,最後通過凝膠遷移電泳實驗測定Ku蛋白與5'粘末耑、3'粘末耑和平末耑3種不同末耑DNA結閤情況.結果 成功構建瞭ku原覈錶達載體pQE-30-ku,併能在宿主菌E.coli M15中錶達,純化後具有結閤不同末耑DNA的酶活性.結論 Ku基因剋隆到原覈宿主菌中能進行錶達、純化,純化後的蛋白具有結閤不同末耑DNA的生物學活性,為分枝桿菌非同源末耑連接的研究奠定瞭基礎.
목적 구건치구분지간균말단결합단백Ku원핵표체재체,병진행표체순화급매학측정.방법 이치구분지간균str.MC2 155기인조DNA위모판,PCR법확증ku기인,구건pQE-30-ku중조질립,재표체숙주균E.coli M15중유도표체단백,Ni2+-NTA친화층석주순화,최후통과응효천이전영실험측정Ku단백여5'점말단、3'점말단화평말단3충불동말단DNA결합정황.결과 성공구건료ku원핵표체재체pQE-30-ku,병능재숙주균E.coli M15중표체,순화후구유결합불동말단DNA적매활성.결론 Ku기인극륭도원핵숙주균중능진행표체、순화,순화후적단백구유결합불동말단DNA적생물학활성,위분지간균비동원말단련접적연구전정료기출.
