中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
1期
183-187
,共5页
黄郁凯%李晓红%潘宇%林秋雄%朱杰宁%江雪燕%叶力通%余细勇
黃鬱凱%李曉紅%潘宇%林鞦雄%硃傑寧%江雪燕%葉力通%餘細勇
황욱개%리효홍%반우%림추웅%주걸저%강설연%협력통%여세용
成年大鼠%骨骼肌干细胞%悬浮培养法
成年大鼠%骨骼肌榦細胞%懸浮培養法
성년대서%골격기간세포%현부배양법
目的:建立高效分离和扩增成年大鼠骨骼肌干细胞的实验方法.方法:通过混合酶消化法从少量成年大鼠骨骼肌样品中分离出骨骼肌干细胞；采用悬浮培养法培养获得骨骼肌干细胞团,批量扩增骨骼肌干细胞；用qRT-PCR和免疫细胞化学染色检测干细胞标志物Nanog、Oct4和骨骼肌干细胞标志物肌源性因子5(myogenic factor 5,Myf5)、配对盒蛋白7(paired box protein 7,Pax7)的表达；成脂或成骨分化诱导培养基诱导检测骨骼肌干细胞的多功能性.结果:采用混合酶消化法可获得骨骼肌干细胞单细胞,在悬浮的培养条件下能快速克隆成骨骼肌细胞团,贴壁培养后能看到骨骼肌干细胞从细胞团中爬出来,和传统的差速贴壁方法相比悬浮培养法获得的骨骼肌干细胞纯度更高,细胞状态更好,干性因子Nanog、Oct 4和骨骼肌干细胞标志物Myf5、Pax 7的表达更高(P＜0.05)；在不同培养基的诱导下能向骨骼肌、成骨和脂肪细胞系分化.结论:悬浮培养法能获得大批量干性好、纯度高、具有多向分化潜能的骨骼肌干细胞,从而为肌肉相关疾病的细胞治疗提供优良的种子细胞.
目的:建立高效分離和擴增成年大鼠骨骼肌榦細胞的實驗方法.方法:通過混閤酶消化法從少量成年大鼠骨骼肌樣品中分離齣骨骼肌榦細胞；採用懸浮培養法培養穫得骨骼肌榦細胞糰,批量擴增骨骼肌榦細胞；用qRT-PCR和免疫細胞化學染色檢測榦細胞標誌物Nanog、Oct4和骨骼肌榦細胞標誌物肌源性因子5(myogenic factor 5,Myf5)、配對盒蛋白7(paired box protein 7,Pax7)的錶達；成脂或成骨分化誘導培養基誘導檢測骨骼肌榦細胞的多功能性.結果:採用混閤酶消化法可穫得骨骼肌榦細胞單細胞,在懸浮的培養條件下能快速剋隆成骨骼肌細胞糰,貼壁培養後能看到骨骼肌榦細胞從細胞糰中爬齣來,和傳統的差速貼壁方法相比懸浮培養法穫得的骨骼肌榦細胞純度更高,細胞狀態更好,榦性因子Nanog、Oct 4和骨骼肌榦細胞標誌物Myf5、Pax 7的錶達更高(P＜0.05)；在不同培養基的誘導下能嚮骨骼肌、成骨和脂肪細胞繫分化.結論:懸浮培養法能穫得大批量榦性好、純度高、具有多嚮分化潛能的骨骼肌榦細胞,從而為肌肉相關疾病的細胞治療提供優良的種子細胞.
목적:건립고효분리화확증성년대서골격기간세포적실험방법.방법:통과혼합매소화법종소량성년대서골격기양품중분리출골격기간세포；채용현부배양법배양획득골격기간세포단,비량확증골격기간세포；용qRT-PCR화면역세포화학염색검측간세포표지물Nanog、Oct4화골격기간세포표지물기원성인자5(myogenic factor 5,Myf5)、배대합단백7(paired box protein 7,Pax7)적표체；성지혹성골분화유도배양기유도검측골격기간세포적다공능성.결과:채용혼합매소화법가획득골격기간세포단세포,재현부적배양조건하능쾌속극륭성골격기세포단,첩벽배양후능간도골격기간세포종세포단중파출래,화전통적차속첩벽방법상비현부배양법획득적골격기간세포순도경고,세포상태경호,간성인자Nanog、Oct 4화골격기간세포표지물Myf5、Pax 7적표체경고(P＜0.05)；재불동배양기적유도하능향골격기、성골화지방세포계분화.결론:현부배양법능획득대비량간성호、순도고、구유다향분화잠능적골격기간세포,종이위기육상관질병적세포치료제공우량적충자세포.
