中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
1期
121-127
,共7页
颜亮%罗滔%蔡军伟%毕志斐%胡巢凤
顏亮%囉滔%蔡軍偉%畢誌斐%鬍巢鳳
안량%라도%채군위%필지비%호소봉
NALP3蛋白%富含亮氨酸重复序列%人细胞周期蛋白H%禽传染性支气管炎病毒%酵母双杂交系统
NALP3蛋白%富含亮氨痠重複序列%人細胞週期蛋白H%禽傳染性支氣管炎病毒%酵母雙雜交繫統
NALP3단백%부함량안산중복서렬%인세포주기단백H%금전염성지기관염병독%효모쌍잡교계통
目的:寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域相互作用的蛋白质分子.方法:克隆NALP3富含亮氨酸重复序列(NALP3-LRR)结构域的DNA序列并经测序检验.应用酵母双杂交技术,构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母双杂交载体,对人胚肺cDNA文库进行杂交筛选,经酵母回交实验验证蛋白质在酵母细胞内的相互作用并对阳性克隆的DNA进行序列测定和生物信息学分析.将筛选到的阳性克隆进一步用免疫共沉淀实验验证NALP3-LRR结构域与阳性蛋白之间相互作用的可靠性.结果:成功克隆NALP3-LRR结构域的DNA序列并经测序检验正确.用酵母双杂交技术对人胚肺cDNA文库进行酵母杂交筛选共获得4个阳性克隆.免疫共沉淀实验证实能与NALP3-LRR结构域发生相互作用的阳性蛋白是人细胞周期蛋白H和禽传染性支气管炎病毒株Cal99的ORF1a.结论:NALP3的富含亮氨酸重复序列结构域能与人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白发生相互作用.
目的:尋找與NALP3富含亮氨痠重複序列(leucine-rich repeat,LRR)結構域相互作用的蛋白質分子.方法:剋隆NALP3富含亮氨痠重複序列(NALP3-LRR)結構域的DNA序列併經測序檢驗.應用酵母雙雜交技術,構建以NALP3-LRR結構域為誘餌基因的酵母雙雜交載體,對人胚肺cDNA文庫進行雜交篩選,經酵母迴交實驗驗證蛋白質在酵母細胞內的相互作用併對暘性剋隆的DNA進行序列測定和生物信息學分析.將篩選到的暘性剋隆進一步用免疫共沉澱實驗驗證NALP3-LRR結構域與暘性蛋白之間相互作用的可靠性.結果:成功剋隆NALP3-LRR結構域的DNA序列併經測序檢驗正確.用酵母雙雜交技術對人胚肺cDNA文庫進行酵母雜交篩選共穫得4箇暘性剋隆.免疫共沉澱實驗證實能與NALP3-LRR結構域髮生相互作用的暘性蛋白是人細胞週期蛋白H和禽傳染性支氣管炎病毒株Cal99的ORF1a.結論:NALP3的富含亮氨痠重複序列結構域能與人細胞週期蛋白H和禽冠狀病毒蛋白髮生相互作用.
목적:심조여NALP3부함량안산중복서렬(leucine-rich repeat,LRR)결구역상호작용적단백질분자.방법:극륭NALP3부함량안산중복서렬(NALP3-LRR)결구역적DNA서렬병경측서검험.응용효모쌍잡교기술,구건이NALP3-LRR결구역위유이기인적효모쌍잡교재체,대인배폐cDNA문고진행잡교사선,경효모회교실험험증단백질재효모세포내적상호작용병대양성극륭적DNA진행서렬측정화생물신식학분석.장사선도적양성극륭진일보용면역공침정실험험증NALP3-LRR결구역여양성단백지간상호작용적가고성.결과:성공극륭NALP3-LRR결구역적DNA서렬병경측서검험정학.용효모쌍잡교기술대인배폐cDNA문고진행효모잡교사선공획득4개양성극륭.면역공침정실험증실능여NALP3-LRR결구역발생상호작용적양성단백시인세포주기단백H화금전염성지기관염병독주Cal99적ORF1a.결론:NALP3적부함량안산중복서렬결구역능여인세포주기단백H화금관상병독단백발생상호작용.
