中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
1期
62-69
,共8页
莫世静%童秀珍%钟茜%邓宇斌
莫世靜%童秀珍%鐘茜%鄧宇斌
막세정%동수진%종천%산우빈
骨髓间充质干细胞%促红细胞生成素%PC12细胞%细胞凋亡
骨髓間充質榦細胞%促紅細胞生成素%PC12細胞%細胞凋亡
골수간충질간세포%촉홍세포생성소%PC12세포%세포조망
目的:观察骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞缺氧损伤及凋亡的影响并探讨其作用机制.方法:将PC12细胞分为以下几组:空白对照组、CoCl2处理组、BM-MSCs-siCTL+ CoCl2处理组和BM-MSCs-siEPO+CoCl2处理组.应用MTT、流式细胞术(FCM)及Hoechst 33258染色法检测BM-MSCs对CoCl2诱导的细胞活性下降及凋亡的影响.采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测BM-MSCs的促红细胞生成素(EPO)表达情况.同时通过RT-PCR法检测PC12细胞的Bcl-2与Bax表达情况.此外应用分光光度法检测caspase-9和-3活性.结果:MTT结果显示BM-MSCs共培养能够提高PC12细胞活力,0.6 mmol/L CoCl2单独处理组24h和48 h细胞存活率仅为(43.0±6.4)％和(33.8±5.7)％,1:15细胞比BM-MSCs共培养24 h和48 h后细胞存活率明显上升,分别为(77.9±3.8)％和(75.2±9.7)％(P＜0.01).RT-PCR和Western blotting显示0.6mmol/L CoCl2处理24h和48 h明显诱导BM-MSCs的EPO表达上调,而EPO siRNA可完全抑制BM-MSCs的EPO表达(P＜0.01).FCM及Hoechst 33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,BM-MSCs-siCTL与PC12细胞共培养可有效抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡,而EPO siRNA可明显阻断BM-MSCs的抗细胞凋亡作用(P＜0.01).RT-PCR结果显示BM-MSCs共培养组PC12细胞的Bcl-2表达较CoCl2处理组明显升高,而Bax表达较CoCl2处理组明显降低；EPO siRNA明显抑制BM-MSCs介导的Bcl-2表达升高和Bax表达降低(P＜0.01).分光光度法结果显示BM-MSCs-siCTL共培养组的caspase-9和-3活性较CoCl2处理组明显降低,而BM-MSCs-siEPO共培养组的caspase-9和-3活性较BM-MSCs-siCTL共培养组明显增加(P＜0.01).结论:BM-MSCs共培养能抑制CoGl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与其上调EPO的表达有关.
目的:觀察骨髓間充質榦細胞(BM-MSCs)對氯化鈷(CoCl2)誘導的PC12細胞缺氧損傷及凋亡的影響併探討其作用機製.方法:將PC12細胞分為以下幾組:空白對照組、CoCl2處理組、BM-MSCs-siCTL+ CoCl2處理組和BM-MSCs-siEPO+CoCl2處理組.應用MTT、流式細胞術(FCM)及Hoechst 33258染色法檢測BM-MSCs對CoCl2誘導的細胞活性下降及凋亡的影響.採用逆轉錄PCR(RT-PCR)和Western blotting檢測BM-MSCs的促紅細胞生成素(EPO)錶達情況.同時通過RT-PCR法檢測PC12細胞的Bcl-2與Bax錶達情況.此外應用分光光度法檢測caspase-9和-3活性.結果:MTT結果顯示BM-MSCs共培養能夠提高PC12細胞活力,0.6 mmol/L CoCl2單獨處理組24h和48 h細胞存活率僅為(43.0±6.4)％和(33.8±5.7)％,1:15細胞比BM-MSCs共培養24 h和48 h後細胞存活率明顯上升,分彆為(77.9±3.8)％和(75.2±9.7)％(P＜0.01).RT-PCR和Western blotting顯示0.6mmol/L CoCl2處理24h和48 h明顯誘導BM-MSCs的EPO錶達上調,而EPO siRNA可完全抑製BM-MSCs的EPO錶達(P＜0.01).FCM及Hoechst 33258結果錶明CoCl2處理能誘導PC12細胞損傷及凋亡,BM-MSCs-siCTL與PC12細胞共培養可有效抑製CoCl2的細胞毒性作用,減少細胞缺氧性損傷及凋亡,而EPO siRNA可明顯阻斷BM-MSCs的抗細胞凋亡作用(P＜0.01).RT-PCR結果顯示BM-MSCs共培養組PC12細胞的Bcl-2錶達較CoCl2處理組明顯升高,而Bax錶達較CoCl2處理組明顯降低；EPO siRNA明顯抑製BM-MSCs介導的Bcl-2錶達升高和Bax錶達降低(P＜0.01).分光光度法結果顯示BM-MSCs-siCTL共培養組的caspase-9和-3活性較CoCl2處理組明顯降低,而BM-MSCs-siEPO共培養組的caspase-9和-3活性較BM-MSCs-siCTL共培養組明顯增加(P＜0.01).結論:BM-MSCs共培養能抑製CoGl2誘導的PC12細胞凋亡,其細胞保護作用的機製可能與其上調EPO的錶達有關.
목적:관찰골수간충질간세포(BM-MSCs)대록화고(CoCl2)유도적PC12세포결양손상급조망적영향병탐토기작용궤제.방법:장PC12세포분위이하궤조:공백대조조、CoCl2처리조、BM-MSCs-siCTL+ CoCl2처리조화BM-MSCs-siEPO+CoCl2처리조.응용MTT、류식세포술(FCM)급Hoechst 33258염색법검측BM-MSCs대CoCl2유도적세포활성하강급조망적영향.채용역전록PCR(RT-PCR)화Western blotting검측BM-MSCs적촉홍세포생성소(EPO)표체정황.동시통과RT-PCR법검측PC12세포적Bcl-2여Bax표체정황.차외응용분광광도법검측caspase-9화-3활성.결과:MTT결과현시BM-MSCs공배양능구제고PC12세포활력,0.6 mmol/L CoCl2단독처리조24h화48 h세포존활솔부위(43.0±6.4)％화(33.8±5.7)％,1:15세포비BM-MSCs공배양24 h화48 h후세포존활솔명현상승,분별위(77.9±3.8)％화(75.2±9.7)％(P＜0.01).RT-PCR화Western blotting현시0.6mmol/L CoCl2처리24h화48 h명현유도BM-MSCs적EPO표체상조,이EPO siRNA가완전억제BM-MSCs적EPO표체(P＜0.01).FCM급Hoechst 33258결과표명CoCl2처리능유도PC12세포손상급조망,BM-MSCs-siCTL여PC12세포공배양가유효억제CoCl2적세포독성작용,감소세포결양성손상급조망,이EPO siRNA가명현조단BM-MSCs적항세포조망작용(P＜0.01).RT-PCR결과현시BM-MSCs공배양조PC12세포적Bcl-2표체교CoCl2처리조명현승고,이Bax표체교CoCl2처리조명현강저；EPO siRNA명현억제BM-MSCs개도적Bcl-2표체승고화Bax표체강저(P＜0.01).분광광도법결과현시BM-MSCs-siCTL공배양조적caspase-9화-3활성교CoCl2처리조명현강저,이BM-MSCs-siEPO공배양조적caspase-9화-3활성교BM-MSCs-siCTL공배양조명현증가(P＜0.01).결론:BM-MSCs공배양능억제CoGl2유도적PC12세포조망,기세포보호작용적궤제가능여기상조EPO적표체유관.
