云南农业大学学报
雲南農業大學學報
운남농업대학학보
JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
1期
32-35
,共4页
李晓鹏%王连春%彭杰军%姬盼%李准%孔宝华%陈海如
李曉鵬%王連春%彭傑軍%姬盼%李準%孔寶華%陳海如
리효붕%왕련춘%팽걸군%희반%리준%공보화%진해여
香石竹斑驳病毒%外壳蛋白基因%原核表达%抗血清%检测
香石竹斑駁病毒%外殼蛋白基因%原覈錶達%抗血清%檢測
향석죽반박병독%외각단백기인%원핵표체%항혈청%검측
香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是侵染香石竹的主要病毒.本研究从已鉴定的CarMV毒源植物中提取总RNA,克隆外壳蛋白(cp)基因后构建pET30a-CP重组质粒,并转入BL21 (DE3) pLysS进行原核表达.通过对诱导温度、初菌浓度、IPTG的浓度等表达条件进行优化,目的蛋白在37℃,IPTG终浓度为1.0 mmol/L的条件下,诱导表达6h后获得最高表达量.采用割胶的方法纯化cp蛋白,纯化后的目的蛋白免疫小鼠获得了特异性抗血清.经Western-blot检测,结果表明所制备的抗血清与诱导表达的重组蛋白及接种CarMV的香石竹样品均发生特异性结合.利用所制备抗血清对昆明地区的48个香石竹样品进行抽检,结果表明香石竹样品的带毒率为79.2％.本研究为大规模抗血清生产、检测应用和深入研究该病毒cp基因与寄主的互作奠定基础.
香石竹斑駁病毒(Carnation mottle virus,CarMV)是侵染香石竹的主要病毒.本研究從已鑒定的CarMV毒源植物中提取總RNA,剋隆外殼蛋白(cp)基因後構建pET30a-CP重組質粒,併轉入BL21 (DE3) pLysS進行原覈錶達.通過對誘導溫度、初菌濃度、IPTG的濃度等錶達條件進行優化,目的蛋白在37℃,IPTG終濃度為1.0 mmol/L的條件下,誘導錶達6h後穫得最高錶達量.採用割膠的方法純化cp蛋白,純化後的目的蛋白免疫小鼠穫得瞭特異性抗血清.經Western-blot檢測,結果錶明所製備的抗血清與誘導錶達的重組蛋白及接種CarMV的香石竹樣品均髮生特異性結閤.利用所製備抗血清對昆明地區的48箇香石竹樣品進行抽檢,結果錶明香石竹樣品的帶毒率為79.2％.本研究為大規模抗血清生產、檢測應用和深入研究該病毒cp基因與寄主的互作奠定基礎.
향석죽반박병독(Carnation mottle virus,CarMV)시침염향석죽적주요병독.본연구종이감정적CarMV독원식물중제취총RNA,극륭외각단백(cp)기인후구건pET30a-CP중조질립,병전입BL21 (DE3) pLysS진행원핵표체.통과대유도온도、초균농도、IPTG적농도등표체조건진행우화,목적단백재37℃,IPTG종농도위1.0 mmol/L적조건하,유도표체6h후획득최고표체량.채용할효적방법순화cp단백,순화후적목적단백면역소서획득료특이성항혈청.경Western-blot검측,결과표명소제비적항혈청여유도표체적중조단백급접충CarMV적향석죽양품균발생특이성결합.이용소제비항혈청대곤명지구적48개향석죽양품진행추검,결과표명향석죽양품적대독솔위79.2％.본연구위대규모항혈청생산、검측응용화심입연구해병독cp기인여기주적호작전정기출.
