厦门大学学报（自然科学版）
廈門大學學報（自然科學版）
하문대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2013年
1期
116-121
,共6页
马琳琳%张明%杨婷%王卫杰%王团老
馬琳琳%張明%楊婷%王衛傑%王糰老
마림림%장명%양정%왕위걸%왕단로
Rab39A%原核表达%多克隆抗体
Rab39A%原覈錶達%多剋隆抗體
Rab39A%원핵표체%다극륭항체
制备抗人Rab39A多克隆抗体并进行纯化检测,以用于Rab39A功能的研究.选取免疫原性强且特异性高的羧基端42个氨基酸(176～217aa)作为目的片段.PCR法扩增并构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rab39C42.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化GST-Rab39C42融合蛋白,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体.然后以亲和层析法纯化抗体,利用Western blot和免疫荧光检测抗体的特异性.结果表明,构建的原核表达载体经IPTG诱导后高效表达GST-Rab39C42蛋白,纯化后抗体质量浓度为1μg/μL;Western blot实验显示,抗体可以识别外源Rab39A蛋白和多个细胞系的内源Rab39A蛋白；抗体中和实验和RNA干扰实验证明了该抗体具有特异性.本研究成功构建了pGEX-4T-1-Rab39C42原核表达载体,并制备了特异性的抗人Rab39A兔多克隆抗体,为进一步研究Rab39A的功能提供了有力的支持.
製備抗人Rab39A多剋隆抗體併進行純化檢測,以用于Rab39A功能的研究.選取免疫原性彊且特異性高的羧基耑42箇氨基痠(176～217aa)作為目的片段.PCR法擴增併構建重組錶達質粒pGEX-4T-1-Rab39C42.異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達併純化GST-Rab39C42融閤蛋白,免疫新西蘭兔,製備多剋隆抗體.然後以親和層析法純化抗體,利用Western blot和免疫熒光檢測抗體的特異性.結果錶明,構建的原覈錶達載體經IPTG誘導後高效錶達GST-Rab39C42蛋白,純化後抗體質量濃度為1μg/μL;Western blot實驗顯示,抗體可以識彆外源Rab39A蛋白和多箇細胞繫的內源Rab39A蛋白；抗體中和實驗和RNA榦擾實驗證明瞭該抗體具有特異性.本研究成功構建瞭pGEX-4T-1-Rab39C42原覈錶達載體,併製備瞭特異性的抗人Rab39A兔多剋隆抗體,為進一步研究Rab39A的功能提供瞭有力的支持.
제비항인Rab39A다극륭항체병진행순화검측,이용우Rab39A공능적연구.선취면역원성강차특이성고적최기단42개안기산(176～217aa)작위목적편단.PCR법확증병구건중조표체질립pGEX-4T-1-Rab39C42.이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체병순화GST-Rab39C42융합단백,면역신서란토,제비다극륭항체.연후이친화층석법순화항체,이용Western blot화면역형광검측항체적특이성.결과표명,구건적원핵표체재체경IPTG유도후고효표체GST-Rab39C42단백,순화후항체질량농도위1μg/μL;Western blot실험현시,항체가이식별외원Rab39A단백화다개세포계적내원Rab39A단백；항체중화실험화RNA간우실험증명료해항체구유특이성.본연구성공구건료pGEX-4T-1-Rab39C42원핵표체재체,병제비료특이성적항인Rab39A토다극륭항체,위진일보연구Rab39A적공능제공료유력적지지.
