CAJ | 학술논문

目的:分别构建含有樱桃红荧光蛋白和蓝色荧光蛋白(BFP)标签的应激蛋白G3BP表达质粒,实现活细胞内G3BP蛋白的红/蓝色荧光标记.方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,分别利用EcoRI和BamHI双酶切法将目的片段连接到pmCheery-C1和pEBFP-N1载体上,再将构建成功的pmCheery-C1-G3BP和pEBFP-N1-G3BP重组质粒转染入HeLa细胞内,以激光共聚焦显微镜及Western印迹法检测红/蓝色荧光蛋白与目的蛋白G3BP的融合表达以及在活细胞内的共定位情况.结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到红/蓝色融合蛋白的表达,共定位分析结果显示两者均可在HeLa细胞胞浆中形成应激颗粒.结论:pmCheery-C 1-G3BP和pEBFP-N1-G3BP构建成功,对G3BP蛋白的红/蓝色荧光标记有助于进行其在细胞应激方面的机制研究.
목적:분별구건함유앵도홍형광단백화람색형광단백(BFP)표첨적응격단백G3BP표체질립,실현활세포내G3BP단백적홍/람색형광표기.방법:이중조질립pEGFP-C1-G3BP위모판,PCR법확증출목적기인,분별이용EcoRI화BamHI쌍매절법장목적편단련접도pmCheery-C1화pEBFP-N1재체상,재장구건성공적pmCheery-C1-G3BP화pEBFP-N1-G3BP중조질립전염입HeLa세포내,이격광공취초현미경급Western인적법검측홍/람색형광단백여목적단백G3BP적융합표체이급재활세포내적공정위정황.결과:이단/쌍매절급기인측서법감정구건적중조질립균무오,형광현미경급Western인적결과균검측도홍/람색융합단백적표체,공정위분석결과현시량자균가재HeLa세포포장중형성응격과립.결론:pmCheery-C 1-G3BP화pEBFP-N1-G3BP구건성공,대G3BP단백적홍/람색형광표기유조우진행기재세포응격방면적궤제연구.