解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2013年
1期
71-74
,共4页
IKKγ基因%载体构建%诱导表达
IKKγ基因%載體構建%誘導錶達
IKKγ기인%재체구건%유도표체
目的 构建重组原核表达载体pGEX-5X-1-IKKγ,诱导GST-IKKγ融合蛋白的表达并以GST-pull down方法得到纯化的融合蛋白.方法 应用PCR技术,以M6P8载体为模板扩增得到IKKγ全长序列,并亚克隆至带有GST标签的pGEX-5X-1载体中.经酶切、测序鉴定后,重组载体转化至原核细胞中并进行诱导表达,以SDS-PAGE凝胶电泳染色鉴定融合蛋白的表达.融合蛋白经GST beads沉降后,Western blot分析、鉴定融合蛋白的表达及纯化情况.结果 将人IKK γ亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-1,酶切、测序鉴定无误.经诱导得到高表达的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳染色后可见高表达条带.Western blot鉴定经GST beads沉降后的蛋白,在74kD鉴定出融合蛋白的特异性条带.结论 成功构建了原核表达载体pGEX-5X-1-IKKγ,并在原核细胞内表达,融合蛋白可以经GST beads沉降用于GST-pulldown实验.
目的 構建重組原覈錶達載體pGEX-5X-1-IKKγ,誘導GST-IKKγ融閤蛋白的錶達併以GST-pull down方法得到純化的融閤蛋白.方法 應用PCR技術,以M6P8載體為模闆擴增得到IKKγ全長序列,併亞剋隆至帶有GST標籤的pGEX-5X-1載體中.經酶切、測序鑒定後,重組載體轉化至原覈細胞中併進行誘導錶達,以SDS-PAGE凝膠電泳染色鑒定融閤蛋白的錶達.融閤蛋白經GST beads沉降後,Western blot分析、鑒定融閤蛋白的錶達及純化情況.結果 將人IKK γ亞剋隆至原覈錶達載體pGEX-5X-1,酶切、測序鑒定無誤.經誘導得到高錶達的融閤蛋白,經SDS-PAGE電泳染色後可見高錶達條帶.Western blot鑒定經GST beads沉降後的蛋白,在74kD鑒定齣融閤蛋白的特異性條帶.結論 成功構建瞭原覈錶達載體pGEX-5X-1-IKKγ,併在原覈細胞內錶達,融閤蛋白可以經GST beads沉降用于GST-pulldown實驗.
목적 구건중조원핵표체재체pGEX-5X-1-IKKγ,유도GST-IKKγ융합단백적표체병이GST-pull down방법득도순화적융합단백.방법 응용PCR기술,이M6P8재체위모판확증득도IKKγ전장서렬,병아극륭지대유GST표첨적pGEX-5X-1재체중.경매절、측서감정후,중조재체전화지원핵세포중병진행유도표체,이SDS-PAGE응효전영염색감정융합단백적표체.융합단백경GST beads침강후,Western blot분석、감정융합단백적표체급순화정황.결과 장인IKK γ아극륭지원핵표체재체pGEX-5X-1,매절、측서감정무오.경유도득도고표체적융합단백,경SDS-PAGE전영염색후가견고표체조대.Western blot감정경GST beads침강후적단백,재74kD감정출융합단백적특이성조대.결론 성공구건료원핵표체재체pGEX-5X-1-IKKγ,병재원핵세포내표체,융합단백가이경GST beads침강용우GST-pulldown실험.
