中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2013年
2期
27-30
,共4页
刘玉芬%于德涵%刘鹏%陈辉%赵文阁
劉玉芬%于德涵%劉鵬%陳輝%趙文閣
류옥분%우덕함%류붕%진휘%조문각
中介蝮蛇%纤溶酶%原核表达%载体构建
中介蝮蛇%纖溶酶%原覈錶達%載體構建
중개복사%섬용매%원핵표체%재체구건
为了从中介蝮蛇毒腺中提取总RNA,研究其具有重要药用价值的纤溶酶,从基因工程的角度进行研究开发蛇毒资源.通过RT-PCR法扩增纤溶酶基因与pMD 18-T载体连接进行TA克隆,得到FLE基因,再亚克隆到pPROEXHTb原核表达载体上,构建重组表达载体；将阳性重组表达载体转化到大肠杆菌中诱导表达,采用SDS-PAGE检测该重组蛋白的分子量.结果表明:成功的构建了重组原核表达载体ppPROEXHTb-FLE,并在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白分子量约为30 KDa.说明可以采用该方法进行中介蝮蛇毒纤溶酶的原核表达,该研究为进行蛇毒纤溶酶的开发奠定了分子基础.
為瞭從中介蝮蛇毒腺中提取總RNA,研究其具有重要藥用價值的纖溶酶,從基因工程的角度進行研究開髮蛇毒資源.通過RT-PCR法擴增纖溶酶基因與pMD 18-T載體連接進行TA剋隆,得到FLE基因,再亞剋隆到pPROEXHTb原覈錶達載體上,構建重組錶達載體；將暘性重組錶達載體轉化到大腸桿菌中誘導錶達,採用SDS-PAGE檢測該重組蛋白的分子量.結果錶明:成功的構建瞭重組原覈錶達載體ppPROEXHTb-FLE,併在大腸桿菌中穫得錶達,重組蛋白分子量約為30 KDa.說明可以採用該方法進行中介蝮蛇毒纖溶酶的原覈錶達,該研究為進行蛇毒纖溶酶的開髮奠定瞭分子基礎.
위료종중개복사독선중제취총RNA,연구기구유중요약용개치적섬용매,종기인공정적각도진행연구개발사독자원.통과RT-PCR법확증섬용매기인여pMD 18-T재체련접진행TA극륭,득도FLE기인,재아극륭도pPROEXHTb원핵표체재체상,구건중조표체재체；장양성중조표체재체전화도대장간균중유도표체,채용SDS-PAGE검측해중조단백적분자량.결과표명:성공적구건료중조원핵표체재체ppPROEXHTb-FLE,병재대장간균중획득표체,중조단백분자량약위30 KDa.설명가이채용해방법진행중개복사독섬용매적원핵표체,해연구위진행사독섬용매적개발전정료분자기출.
