山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
2期
25-28
,共4页
王景景%郑晨%丁楠%熊慧%宋金芝%赵纲%邓艳秋
王景景%鄭晨%丁楠%熊慧%宋金芝%趙綱%鄧豔鞦
왕경경%정신%정남%웅혜%송금지%조강%산염추
葡萄糖胺酶抑制剂%NAG-Ae%O-糖基化%tau蛋白%磷酸化%神经退行性疾病
葡萄糖胺酶抑製劑%NAG-Ae%O-糖基化%tau蛋白%燐痠化%神經退行性疾病
포도당알매억제제%NAG-Ae%O-당기화%tau단백%린산화%신경퇴행성질병
目的 观察提高O-糖基化水平对CHO-K1细胞中突变型R406W tau蛋白过度磷酸化及细胞轴突转运功能的影响.方法 分别将突变型PSG-5 R406W tau质粒和PSG-5空载体质粒转染CHO-K1细胞.将成功转染PSG-5 R406W tau质粒的CHO-K1细胞分为实验组与对照组,分别加入20μM的NAG-Ae及等量的DMEM/F12培养基,转染PSG-5空载体的细胞为空载体组,培养12 h.用Western blot法检测tau蛋白表达；免疫印迹法检测实验组与对照组细胞tau蛋白的糖基化及磷酸化水平；荧光漂白后恢复技术(FRAP)检测三组细胞漂白后荧光恢复的速度以表示细胞轴突转运速度.结果 转染空载体的细胞未见tau蛋白表达,转染PSG-5 tau R406W的细胞tau蛋白呈高表达.实验组与对照组细胞O-糖基化水平分别为1.30±0.09、0.59 ±0.04(P ＜0.05).实验组tauThr205、tauSer396、tauThr212位点磷酸化水平分别为0.44±0.21、0.98±0.01、0.44±0.19,对照组分别为1.11 ±0.38、1.34±0.22、0.79 ±0.05,两组相比,P均＜0.05.10、40、70 s时实验组荧光强度分别为262.00±12.50、300.00±10.00、461.66±10.40,对照组分别58.33±10.40、131.66±11.54、208.33±14.43,空载体组分别为514.00±10.14、888.33±11.06、1188.00± 10.60,三组相比,P均＜0.05.结论 提高CHO-K1细胞的O-糖基化水平有助于减轻突变型tau蛋白的过度磷酸化水平,改善细胞轴突转运功能.
目的 觀察提高O-糖基化水平對CHO-K1細胞中突變型R406W tau蛋白過度燐痠化及細胞軸突轉運功能的影響.方法 分彆將突變型PSG-5 R406W tau質粒和PSG-5空載體質粒轉染CHO-K1細胞.將成功轉染PSG-5 R406W tau質粒的CHO-K1細胞分為實驗組與對照組,分彆加入20μM的NAG-Ae及等量的DMEM/F12培養基,轉染PSG-5空載體的細胞為空載體組,培養12 h.用Western blot法檢測tau蛋白錶達；免疫印跡法檢測實驗組與對照組細胞tau蛋白的糖基化及燐痠化水平；熒光漂白後恢複技術(FRAP)檢測三組細胞漂白後熒光恢複的速度以錶示細胞軸突轉運速度.結果 轉染空載體的細胞未見tau蛋白錶達,轉染PSG-5 tau R406W的細胞tau蛋白呈高錶達.實驗組與對照組細胞O-糖基化水平分彆為1.30±0.09、0.59 ±0.04(P ＜0.05).實驗組tauThr205、tauSer396、tauThr212位點燐痠化水平分彆為0.44±0.21、0.98±0.01、0.44±0.19,對照組分彆為1.11 ±0.38、1.34±0.22、0.79 ±0.05,兩組相比,P均＜0.05.10、40、70 s時實驗組熒光彊度分彆為262.00±12.50、300.00±10.00、461.66±10.40,對照組分彆58.33±10.40、131.66±11.54、208.33±14.43,空載體組分彆為514.00±10.14、888.33±11.06、1188.00± 10.60,三組相比,P均＜0.05.結論 提高CHO-K1細胞的O-糖基化水平有助于減輕突變型tau蛋白的過度燐痠化水平,改善細胞軸突轉運功能.
목적 관찰제고O-당기화수평대CHO-K1세포중돌변형R406W tau단백과도린산화급세포축돌전운공능적영향.방법 분별장돌변형PSG-5 R406W tau질립화PSG-5공재체질립전염CHO-K1세포.장성공전염PSG-5 R406W tau질립적CHO-K1세포분위실험조여대조조,분별가입20μM적NAG-Ae급등량적DMEM/F12배양기,전염PSG-5공재체적세포위공재체조,배양12 h.용Western blot법검측tau단백표체；면역인적법검측실험조여대조조세포tau단백적당기화급린산화수평；형광표백후회복기술(FRAP)검측삼조세포표백후형광회복적속도이표시세포축돌전운속도.결과 전염공재체적세포미견tau단백표체,전염PSG-5 tau R406W적세포tau단백정고표체.실험조여대조조세포O-당기화수평분별위1.30±0.09、0.59 ±0.04(P ＜0.05).실험조tauThr205、tauSer396、tauThr212위점린산화수평분별위0.44±0.21、0.98±0.01、0.44±0.19,대조조분별위1.11 ±0.38、1.34±0.22、0.79 ±0.05,량조상비,P균＜0.05.10、40、70 s시실험조형광강도분별위262.00±12.50、300.00±10.00、461.66±10.40,대조조분별58.33±10.40、131.66±11.54、208.33±14.43,공재체조분별위514.00±10.14、888.33±11.06、1188.00± 10.60,삼조상비,P균＜0.05.결론 제고CHO-K1세포적O-당기화수평유조우감경돌변형tau단백적과도린산화수평,개선세포축돌전운공능.
