南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
2期
202-206
,共5页
刘强%顾金金%罗敏%施琼
劉彊%顧金金%囉敏%施瓊
류강%고금금%라민%시경
miRNA-30a%miRNA-30e%AdEasy系统%荧光定量PCR
miRNA-30a%miRNA-30e%AdEasy繫統%熒光定量PCR
miRNA-30a%miRNA-30e%AdEasy계통%형광정량PCR
目的 构建稳定表达成熟miRNA-30a和miRNA-30e腺病毒表达载体.方法 小鼠基因组中分别扩增出带有酶切位点的mmu-miR-30a、mmu-miR-30e目的基因,目的基因连接到穿梭质粒pSES-HUS,带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒AdEasy1上,重组质粒转染到Hek-293细胞中包装成腺病毒载体,反复扩增之后获得高滴度的pAd-mmu-miR-30a、pAd-mmu-miR-30e腺病毒.用目的腺病毒分3组(RFP对照组,miR-30a组,miR-30e组)感染小鼠Mefs细胞,用荧光定量PCR方法检测mmu-miR-30a、mmu-miR-30e表达情况.结果 分别扩增出带有酶切位点的357 bpmmu-miR-30a,324 bpmmu-miR-30e,并成功连接到pSES-HUS上,进一步与AdEasy1重组,包装得到腺病毒表达载体,通过荧光定量PCR检测,Mefs细胞中mmu-miR-30a升高26.46±7.46倍,mmu-miR-30e升高2.76±0.25倍.结论 成功构建了成熟miRNA的腺病毒表达载体.
目的 構建穩定錶達成熟miRNA-30a和miRNA-30e腺病毒錶達載體.方法 小鼠基因組中分彆擴增齣帶有酶切位點的mmu-miR-30a、mmu-miR-30e目的基因,目的基因連接到穿梭質粒pSES-HUS,帶有目的基因的穿梭質粒重組到骨架質粒AdEasy1上,重組質粒轉染到Hek-293細胞中包裝成腺病毒載體,反複擴增之後穫得高滴度的pAd-mmu-miR-30a、pAd-mmu-miR-30e腺病毒.用目的腺病毒分3組(RFP對照組,miR-30a組,miR-30e組)感染小鼠Mefs細胞,用熒光定量PCR方法檢測mmu-miR-30a、mmu-miR-30e錶達情況.結果 分彆擴增齣帶有酶切位點的357 bpmmu-miR-30a,324 bpmmu-miR-30e,併成功連接到pSES-HUS上,進一步與AdEasy1重組,包裝得到腺病毒錶達載體,通過熒光定量PCR檢測,Mefs細胞中mmu-miR-30a升高26.46±7.46倍,mmu-miR-30e升高2.76±0.25倍.結論 成功構建瞭成熟miRNA的腺病毒錶達載體.
목적 구건은정표체성숙miRNA-30a화miRNA-30e선병독표체재체.방법 소서기인조중분별확증출대유매절위점적mmu-miR-30a、mmu-miR-30e목적기인,목적기인련접도천사질립pSES-HUS,대유목적기인적천사질립중조도골가질립AdEasy1상,중조질립전염도Hek-293세포중포장성선병독재체,반복확증지후획득고적도적pAd-mmu-miR-30a、pAd-mmu-miR-30e선병독.용목적선병독분3조(RFP대조조,miR-30a조,miR-30e조)감염소서Mefs세포,용형광정량PCR방법검측mmu-miR-30a、mmu-miR-30e표체정황.결과 분별확증출대유매절위점적357 bpmmu-miR-30a,324 bpmmu-miR-30e,병성공련접도pSES-HUS상,진일보여AdEasy1중조,포장득도선병독표체재체,통과형광정량PCR검측,Mefs세포중mmu-miR-30a승고26.46±7.46배,mmu-miR-30e승고2.76±0.25배.결론 성공구건료성숙miRNA적선병독표체재체.
