安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2013年
3期
232-235
,共4页
李新颖%潘林鑫%耿慧武%刘君%刘晓颖%范礼斌
李新穎%潘林鑫%耿慧武%劉君%劉曉穎%範禮斌
리신영%반림흠%경혜무%류군%류효영%범례빈
金属硫蛋白%细胞定位%转染%免疫印迹
金屬硫蛋白%細胞定位%轉染%免疫印跡
금속류단백%세포정위%전염%면역인적
目的 用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人金属硫蛋白2A(MT2A)真核表达载体,用其转染HEK 293T,COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位.方法 设计带FLAG-tag的引物,以人MT2A全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增MT2A全长序列,然后插入pCDNA 3.1中构建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;脂质体法转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察MT2A表达的蛋白在细胞内定位.结果 正确构建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;其在HEK 293T细胞中能有效地表达;免疫荧光实验表明在COS-7细胞中,MT2A主要分布在细胞质内.结论 该研究结果为了解MT2A 在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础.
目的 用基因剋隆方法構建帶FLAG-tag的人金屬硫蛋白2A(MT2A)真覈錶達載體,用其轉染HEK 293T,COS-7細胞觀察MT2A在增殖細胞內的錶達和定位.方法 設計帶FLAG-tag的引物,以人MT2A全長cDNA序列的質粒為模闆,PCR法擴增MT2A全長序列,然後插入pCDNA 3.1中構建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG質粒;將構建的質粒轉染至HEK 293T細胞,提取總蛋白,進行Western blot檢測;脂質體法轉染至COS-7細胞,熒光顯微鏡下觀察MT2A錶達的蛋白在細胞內定位.結果 正確構建瞭pCDNA 3.1-MT2A-FLAG質粒;其在HEK 293T細胞中能有效地錶達;免疫熒光實驗錶明在COS-7細胞中,MT2A主要分佈在細胞質內.結論 該研究結果為瞭解MT2A 在細胞內與其他蛋白質相互作用及功能提供瞭一定的基礎.
목적 용기인극륭방법구건대FLAG-tag적인금속류단백2A(MT2A)진핵표체재체,용기전염HEK 293T,COS-7세포관찰MT2A재증식세포내적표체화정위.방법 설계대FLAG-tag적인물,이인MT2A전장cDNA서렬적질립위모판,PCR법확증MT2A전장서렬,연후삽입pCDNA 3.1중구건pCDNA 3.1-MT2A-FLAG질립;장구건적질립전염지HEK 293T세포,제취총단백,진행Western blot검측;지질체법전염지COS-7세포,형광현미경하관찰MT2A표체적단백재세포내정위.결과 정학구건료pCDNA 3.1-MT2A-FLAG질립;기재HEK 293T세포중능유효지표체;면역형광실험표명재COS-7세포중,MT2A주요분포재세포질내.결론 해연구결과위료해MT2A 재세포내여기타단백질상호작용급공능제공료일정적기출.
