CAJ | 학술논문

利用抑制消减杂交(SSH)技术分离嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila诱导中华绒螫蟹(Eriocheir sinensis)差异表达的基因,以血淋巴细胞为材料,提取感染前后总RNA,经mRNA分离、cDNA合成、酶切、加接头后分别以感染组为检测子(tester)、对照组为驱动子(driver)进行正向抑制性消减杂交,以对照组为检测子、感染组为驱动子进行反向消减杂交,成功获得了中华绒螫蟹正反双向差异消减cDNA文库；对构建的文库进行菌落PCR鉴定发现,克隆中插入的片段主要分布在100-1 000 bp之间；随机选取54个阳性克隆测序,共获得37条有效表达序列标签(EST)序列,将测序结果提交到GenBank进行Blastn比对发现,6条与其他物种的免疫基因序列具有较高的同源性.上述结果表明,构建的文库质量较好,且差异表达的与抗病相关的基因得到了富集,为进一步开展中华绒螯蟹抗病重要功能基因的筛选、克隆和功能分析奠定了基础,为揭示中华绒螯蟹抗病的分子机理提供了理论依据.
이용억제소감잡교(SSH)기술분리기수기단포균(Aeromonas hydrophila유도중화융석해(Eriocheir sinensis)차이표체적기인,이혈림파세포위재료,제취감염전후총RNA,경mRNA분리、cDNA합성、매절、가접두후분별이감염조위검측자(tester)、대조조위구동자(driver)진행정향억제성소감잡교,이대조조위검측자、감염조위구동자진행반향소감잡교,성공획득료중화융석해정반쌍향차이소감cDNA문고；대구건적문고진행균락PCR감정발현,극륭중삽입적편단주요분포재100-1 000 bp지간；수궤선취54개양성극륭측서,공획득37조유효표체서렬표첨(EST)서렬,장측서결과제교도GenBank진행Blastn비대발현,6조여기타물충적면역기인서렬구유교고적동원성.상술결과표명,구건적문고질량교호,차차이표체적여항병상관적기인득도료부집,위진일보개전중화융오해항병중요공능기인적사선、극륭화공능분석전정료기출,위게시중화융오해항병적분자궤리제공료이론의거.