昆明医科大学学报
昆明醫科大學學報
곤명의과대학학보
Journal of Kunming Medical University
2013年
3期
31-34
,共4页
刘为军%王昆华%师义%陈贤玉%郭世奎%徐玉
劉為軍%王昆華%師義%陳賢玉%郭世奎%徐玉
류위군%왕곤화%사의%진현옥%곽세규%서옥
CD1d基因%GFP基因%慢病毒%转染
CD1d基因%GFP基因%慢病毒%轉染
CD1d기인%GFP기인%만병독%전염
目的 构建人免疫基因CD1d与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因慢病毒载体并转染人胰腺癌细胞(PANC-1).方法 实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增获得CD1d的全外显子片段,使之克隆到带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体质粒中,慢病毒包装质粒和穿梭质粒转染293T细胞,包装成功后收集上清,浓缩,鉴定.通过慢病毒转染预实验确定MOI,进行人CD1d重组慢病毒载体转染胰腺癌PANC-1细胞株.结果 电泳鉴定结果与目的基因表达条带完全吻合,克隆测序结果与NCBI收录的CD1d基因序列完全一致.重组慢病毒质粒可高效转染PANC-1细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光.结论 成功构建了CD1d与GFP融合基因慢病毒表达载体并转染人胰腺癌细胞.
目的 構建人免疫基因CD1d與綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融閤基因慢病毒載體併轉染人胰腺癌細胞(PANC-1).方法 實時定量聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法擴增穫得CD1d的全外顯子片段,使之剋隆到帶GFP熒光報告基因慢病毒錶達載體質粒中,慢病毒包裝質粒和穿梭質粒轉染293T細胞,包裝成功後收集上清,濃縮,鑒定.通過慢病毒轉染預實驗確定MOI,進行人CD1d重組慢病毒載體轉染胰腺癌PANC-1細胞株.結果 電泳鑒定結果與目的基因錶達條帶完全吻閤,剋隆測序結果與NCBI收錄的CD1d基因序列完全一緻.重組慢病毒質粒可高效轉染PANC-1細胞,熒光顯微鏡下可觀察到大量綠色熒光.結論 成功構建瞭CD1d與GFP融閤基因慢病毒錶達載體併轉染人胰腺癌細胞.
목적 구건인면역기인CD1d여록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)융합기인만병독재체병전염인이선암세포(PANC-1).방법 실시정량취합매련반응(RT-PCR)방법확증획득CD1d적전외현자편단,사지극륭도대GFP형광보고기인만병독표체재체질립중,만병독포장질립화천사질립전염293T세포,포장성공후수집상청,농축,감정.통과만병독전염예실험학정MOI,진행인CD1d중조만병독재체전염이선암PANC-1세포주.결과 전영감정결과여목적기인표체조대완전문합,극륭측서결과여NCBI수록적CD1d기인서렬완전일치.중조만병독질립가고효전염PANC-1세포,형광현미경하가관찰도대량록색형광.결론 성공구건료CD1d여GFP융합기인만병독표체재체병전염인이선암세포.
