昆明医科大学学报
昆明醫科大學學報
곤명의과대학학보
Journal of Kunming Medical University
2013年
3期
8-11
,共4页
张芳%任晓丽%罗得华%罗沈强%王文举%张华堂%田长富
張芳%任曉麗%囉得華%囉瀋彊%王文舉%張華堂%田長富
장방%임효려%라득화%라침강%왕문거%장화당%전장부
蛋氨酸酶GST标签%多抗制备
蛋氨痠酶GST標籤%多抗製備
단안산매GST표첨%다항제비
目的 优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法 将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Met)的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1∶128,间接Elisa法测效价1∶1×105.结果 成功表达纯化出纯度大于90％的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论 所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化.
目的 優化錶達條件後純化齣切除GST標籤的Met-PGEX-4T-1蛋白,製備齣假單胞菌來源的多剋隆抗體.方法 將蛋氨痠酶(L-methionine gamma-lyase,Met)的基因剋隆至pBSK載體中,形成重組質粒pBSK-Met,採用基因工程技術將pBSK-Met與PGEX-4T-1載體連接,形成Met-PGEX.利用大腸桿菌錶達繫統誘導錶達齣Met-PGEX,採用親和層析法過柱純化Met-PGEX,凝血酶切除分子量為26KD的GST標籤,免疫新西蘭兔製備齣蛋氨痠酶多剋隆抗體Met PcAb,雙嚮免疫擴散實驗測多剋隆抗體效價為1∶128,間接Elisa法測效價1∶1×105.結果 成功錶達純化齣純度大于90％的Met-PGEX併製備齣多剋隆抗體.結論 所製備的多剋隆抗體可用于檢測不同來源重組蛋氨痠酶抗原差異性變化.
목적 우화표체조건후순화출절제GST표첨적Met-PGEX-4T-1단백,제비출가단포균래원적다극륭항체.방법 장단안산매(L-methionine gamma-lyase,Met)적기인극륭지pBSK재체중,형성중조질립pBSK-Met,채용기인공정기술장pBSK-Met여PGEX-4T-1재체련접,형성Met-PGEX.이용대장간균표체계통유도표체출Met-PGEX,채용친화층석법과주순화Met-PGEX,응혈매절제분자량위26KD적GST표첨,면역신서란토제비출단안산매다극륭항체Met PcAb,쌍향면역확산실험측다극륭항체효개위1∶128,간접Elisa법측효개1∶1×105.결과 성공표체순화출순도대우90％적Met-PGEX병제비출다극륭항체.결론 소제비적다극륭항체가용우검측불동래원중조단안산매항원차이성변화.
