CAJ | 학술논문

目的采用实时荧光PCR结合融解曲线分析的方法快速将临床常见曲霉菌鉴定到种的水平.方法 ①普通PCR扩增真菌ITS区后进行序列比对,准确鉴定菌种并设计种特异性引物和探针.②采用实时荧光PCR的方法及融解曲线分析,根据不同的解链温度将5种临床常见曲霉菌鉴定到种的水平.③特异性、敏感性、重复性试验.结果 ①解链曲线分析显示,不同种曲霉菌的种特异性探针有特异的Tm值,根据Tm值的不同可以将5种曲霉菌区分开来:烟曲霉Tm =61.4℃,黄曲霉Tm=57.4℃,黑曲霉Tm=67.7℃,土曲霉Tm=55.2℃和64.5℃,构巢曲霉Tm=65.8℃.其中小孢根霉和疣状瓶霉与烟曲霉探针发生交叉反应,阴性对照不出现特异性的解链曲线.②该方法对5种曲霉菌的检测下限分别为:烟曲霉56.8 fg,黄曲霉1 110fg,黑曲霉13.7 fg,土曲霉123 fg,构巢曲霉780 fg.③重复性试验结果显示,同一种曲霉菌的Tm值波动范围不超过0.5℃.结论采用实时荧光PCR结合融解曲线分析的方法可以快速准确地将临床常见曲霉菌鉴定到种的水平,具有良好的敏感性、特异性和可重复性,有助于临床侵袭性曲霉感染的诊断和指导抗真菌药物使用.
목적 채용실시형광PCR결합융해곡선분석적방법쾌속장림상상견곡매균감정도충적수평.방법 ①보통PCR확증진균ITS구후진행서렬비대,준학감정균충병설계충특이성인물화탐침.②채용실시형광PCR적방법급융해곡선분석,근거불동적해련온도장5충림상상견곡매균감정도충적수평.③특이성、민감성、중복성시험.결과 ①해련곡선분석현시,불동충곡매균적충특이성탐침유특이적Tm치,근거Tm치적불동가이장5충곡매균구분개래:연곡매Tm =61.4℃,황곡매Tm=57.4℃,흑곡매Tm=67.7℃,토곡매Tm=55.2℃화64.5℃,구소곡매Tm=65.8℃.기중소포근매화우상병매여연곡매탐침발생교차반응,음성대조불출현특이성적해련곡선.②해방법대5충곡매균적검측하한분별위:연곡매56.8 fg,황곡매1 110fg,흑곡매13.7 fg,토곡매123 fg,구소곡매780 fg.③중복성시험결과현시,동일충곡매균적Tm치파동범위불초과0.5℃.결론 채용실시형광PCR결합융해곡선분석적방법가이쾌속준학지장림상상견곡매균감정도충적수평,구유량호적민감성、특이성화가중복성,유조우림상침습성곡매감염적진단화지도항진균약물사용.