中国实验方剂学杂志
中國實驗方劑學雜誌
중국실험방제학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE
2012年
16期
119-122
,共4页
李喜凤%邱天宝%张红梅%胡利欣%胡春月%郑楠楠%唐露
李喜鳳%邱天寶%張紅梅%鬍利訢%鬍春月%鄭楠楠%唐露
리희봉%구천보%장홍매%호리흔%호춘월%정남남%당로
蒲公英%ISSR-PCR%正交实验设计
蒲公英%ISSR-PCR%正交實驗設計
포공영%ISSR-PCR%정교실험설계
目的:优化蒲公英ISSR-PCR反应体系及扩增程序；筛选适合的引物,并确定最佳退火温度.方法:采用CTAB法提取蒲公英叶片的DNA,利用正交试验设计,从Taq酶MIX、模板DNA、引物3种因素2个水平,对蒲公英ISSR-PCR反应体系进行考察；采用单因素实验对其扩增程序进行优化.结果:确立了适合于蒲公英的最佳ISSR-PCR反应方法,即在25 μL反应体系中,内含Taq酶MIX 15 μL(1.25 UTaq DNA聚合酶,1.8 mmol·L-1 Mg2+,dNTPs各0.24 mmol·L-1),0.3 μmol·L-1引物,5 ng模板.在此基础上,从50条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度.结论:采用单因子试验和正交设计方法可以快速建立ISSR-PCR反应体系,经过验证,证明该体系稳定可靠,可用于蒲公英遗传分析.
目的:優化蒲公英ISSR-PCR反應體繫及擴增程序；篩選適閤的引物,併確定最佳退火溫度.方法:採用CTAB法提取蒲公英葉片的DNA,利用正交試驗設計,從Taq酶MIX、模闆DNA、引物3種因素2箇水平,對蒲公英ISSR-PCR反應體繫進行攷察；採用單因素實驗對其擴增程序進行優化.結果:確立瞭適閤于蒲公英的最佳ISSR-PCR反應方法,即在25 μL反應體繫中,內含Taq酶MIX 15 μL(1.25 UTaq DNA聚閤酶,1.8 mmol·L-1 Mg2+,dNTPs各0.24 mmol·L-1),0.3 μmol·L-1引物,5 ng模闆.在此基礎上,從50條引物中篩選齣16條擴增穩定、多態性豐富的ISSR引物,併通過梯度PCR試驗,確定引物最佳退火溫度.結論:採用單因子試驗和正交設計方法可以快速建立ISSR-PCR反應體繫,經過驗證,證明該體繫穩定可靠,可用于蒲公英遺傳分析.
목적:우화포공영ISSR-PCR반응체계급확증정서；사선괄합적인물,병학정최가퇴화온도.방법:채용CTAB법제취포공영협편적DNA,이용정교시험설계,종Taq매MIX、모판DNA、인물3충인소2개수평,대포공영ISSR-PCR반응체계진행고찰；채용단인소실험대기확증정서진행우화.결과:학립료괄합우포공영적최가ISSR-PCR반응방법,즉재25 μL반응체계중,내함Taq매MIX 15 μL(1.25 UTaq DNA취합매,1.8 mmol·L-1 Mg2+,dNTPs각0.24 mmol·L-1),0.3 μmol·L-1인물,5 ng모판.재차기출상,종50조인물중사선출16조확증은정、다태성봉부적ISSR인물,병통과제도PCR시험,학정인물최가퇴화온도.결론:채용단인자시험화정교설계방법가이쾌속건립ISSR-PCR반응체계,경과험증,증명해체계은정가고,가용우포공영유전분석.
