农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2013年
1期
106-111
,共6页
苏云金杆菌%Cry2Ab%可溶蛋白%多克隆抗体
囌雲金桿菌%Cry2Ab%可溶蛋白%多剋隆抗體
소운금간균%Cry2Ab%가용단백%다극륭항체
苏云金杆菌Cry2Ab蛋白是一类对鳞翅目昆虫有特异性毒性作用的毒素蛋白,已广泛应用于针对鳞翅目害虫的防治之中.依据苏云金杆菌cry2Ab基因序列设计一对全长引物,从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis WB9菌株总DNA中克隆出cry2Ab基因全序列,构建Cry2Ab-PK表达载体,将获得的Cry2Ab-PK阳性克隆进行原核诱导表达,获得约90 kD的Cry2Ab-GST融合蛋白,经批量纯化并切除GST标签后获得可溶Cry2Ab蛋白,约65 kD.利用纯化Cry2Ab可溶蛋白免疫新西兰雄性大白兔(Oryctolagusc uniculus),制备Cry2Ab兔源多克隆抗血清,通过间接ELISA法测定Cry2Ab抗血清效价超过1∶150 000.Westem blot测定结果表明,制备的Cry2Ab兔源抗血清能特异性识别Cry2Aa及Cry2Ab抗原蛋白,不能识别Cry1Ab及Cry3Aa抗原蛋白.研究结果对深入研究Cry2A毒素蛋白作用机理及毒素与受体间互作关系提供了技术支持.
囌雲金桿菌Cry2Ab蛋白是一類對鱗翅目昆蟲有特異性毒性作用的毒素蛋白,已廣汎應用于針對鱗翅目害蟲的防治之中.依據囌雲金桿菌cry2Ab基因序列設計一對全長引物,從囌雲金桿菌(Bacillus thuringiensis WB9菌株總DNA中剋隆齣cry2Ab基因全序列,構建Cry2Ab-PK錶達載體,將穫得的Cry2Ab-PK暘性剋隆進行原覈誘導錶達,穫得約90 kD的Cry2Ab-GST融閤蛋白,經批量純化併切除GST標籤後穫得可溶Cry2Ab蛋白,約65 kD.利用純化Cry2Ab可溶蛋白免疫新西蘭雄性大白兔(Oryctolagusc uniculus),製備Cry2Ab兔源多剋隆抗血清,通過間接ELISA法測定Cry2Ab抗血清效價超過1∶150 000.Westem blot測定結果錶明,製備的Cry2Ab兔源抗血清能特異性識彆Cry2Aa及Cry2Ab抗原蛋白,不能識彆Cry1Ab及Cry3Aa抗原蛋白.研究結果對深入研究Cry2A毒素蛋白作用機理及毒素與受體間互作關繫提供瞭技術支持.
소운금간균Cry2Ab단백시일류대린시목곤충유특이성독성작용적독소단백,이엄범응용우침대린시목해충적방치지중.의거소운금간균cry2Ab기인서렬설계일대전장인물,종소운금간균(Bacillus thuringiensis WB9균주총DNA중극륭출cry2Ab기인전서렬,구건Cry2Ab-PK표체재체,장획득적Cry2Ab-PK양성극륭진행원핵유도표체,획득약90 kD적Cry2Ab-GST융합단백,경비량순화병절제GST표첨후획득가용Cry2Ab단백,약65 kD.이용순화Cry2Ab가용단백면역신서란웅성대백토(Oryctolagusc uniculus),제비Cry2Ab토원다극륭항혈청,통과간접ELISA법측정Cry2Ab항혈청효개초과1∶150 000.Westem blot측정결과표명,제비적Cry2Ab토원항혈청능특이성식별Cry2Aa급Cry2Ab항원단백,불능식별Cry1Ab급Cry3Aa항원단백.연구결과대심입연구Cry2A독소단백작용궤리급독소여수체간호작관계제공료기술지지.
