农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2013年
1期
19-28
,共10页
Tol2%大黄鱼肌肉生长抑素前肽%转基因%生长
Tol2%大黃魚肌肉生長抑素前肽%轉基因%生長
Tol2%대황어기육생장억소전태%전기인%생장
本实验研究了大黄鱼肌肉生长抑素前肽基因对红鲤的促生长作用.分别通过RT-PCR和PCR从大黄鱼(Larimichtys crocea)和pIRES-EGFP质粒扩增得到了肌肉生长抑素(MSTN)前肽基因及核糖体内部进入位点序列(IRES)-增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)片段,经测序验证正确后,构建了Tol2转座子供体质粒pT2AL200R150G-MSTⅣpropepti de-IRES-EGFP.通过精子介导法(S1、S2组)、电穿孔法(E1、E2组)及基因枪法构建转基因红鲤(Cyprinus carpio),孵化72 h后的鱼苗经荧光显微镜检测,EGFP表达阳性率为:精子介导法S1组38％,精子介导法S2组48％,电穿孔E1组47％,电穿孔E2组53％,基因枪组2％;孵化10d的仔鱼RT-PCR检测EGFP和MSTN前肽基因阳性率为:精子介导法S1组35％,精子介导法S2组45％,电穿孔E1组45％,电穿孔E2组55％,基因枪组1.8％.孵化后75 d转基因红鲤与对照组相比,体长和体重分别提高了21.31％和27.59％.本实验结果表明,精子经高渗、低渗保存剂处理并通过电穿孔作用可大幅提高基因转移效率.
本實驗研究瞭大黃魚肌肉生長抑素前肽基因對紅鯉的促生長作用.分彆通過RT-PCR和PCR從大黃魚(Larimichtys crocea)和pIRES-EGFP質粒擴增得到瞭肌肉生長抑素(MSTN)前肽基因及覈糖體內部進入位點序列(IRES)-增彊型綠色熒光蛋白基因(EGFP)片段,經測序驗證正確後,構建瞭Tol2轉座子供體質粒pT2AL200R150G-MSTⅣpropepti de-IRES-EGFP.通過精子介導法(S1、S2組)、電穿孔法(E1、E2組)及基因鎗法構建轉基因紅鯉(Cyprinus carpio),孵化72 h後的魚苗經熒光顯微鏡檢測,EGFP錶達暘性率為:精子介導法S1組38％,精子介導法S2組48％,電穿孔E1組47％,電穿孔E2組53％,基因鎗組2％;孵化10d的仔魚RT-PCR檢測EGFP和MSTN前肽基因暘性率為:精子介導法S1組35％,精子介導法S2組45％,電穿孔E1組45％,電穿孔E2組55％,基因鎗組1.8％.孵化後75 d轉基因紅鯉與對照組相比,體長和體重分彆提高瞭21.31％和27.59％.本實驗結果錶明,精子經高滲、低滲保存劑處理併通過電穿孔作用可大幅提高基因轉移效率.
본실험연구료대황어기육생장억소전태기인대홍리적촉생장작용.분별통과RT-PCR화PCR종대황어(Larimichtys crocea)화pIRES-EGFP질립확증득도료기육생장억소(MSTN)전태기인급핵당체내부진입위점서렬(IRES)-증강형록색형광단백기인(EGFP)편단,경측서험증정학후,구건료Tol2전좌자공체질립pT2AL200R150G-MSTⅣpropepti de-IRES-EGFP.통과정자개도법(S1、S2조)、전천공법(E1、E2조)급기인창법구건전기인홍리(Cyprinus carpio),부화72 h후적어묘경형광현미경검측,EGFP표체양성솔위:정자개도법S1조38％,정자개도법S2조48％,전천공E1조47％,전천공E2조53％,기인창조2％;부화10d적자어RT-PCR검측EGFP화MSTN전태기인양성솔위:정자개도법S1조35％,정자개도법S2조45％,전천공E1조45％,전천공E2조55％,기인창조1.8％.부화후75 d전기인홍리여대조조상비,체장화체중분별제고료21.31％화27.59％.본실험결과표명,정자경고삼、저삼보존제처리병통과전천공작용가대폭제고기인전이효솔.
