川北医学院学报
川北醫學院學報
천북의학원학보
JOURNAL OF NORTH SICHUAN MEDICAL COLLEGE
2013年
2期
112-116
,共5页
田瑞敏%鄢佳程%易芳%王含彦%宋永燕%唐华英%陈建业
田瑞敏%鄢佳程%易芳%王含彥%宋永燕%唐華英%陳建業
전서민%언가정%역방%왕함언%송영연%당화영%진건업
髓鞘碱性蛋白%21.5kD MBP-shRNA表达载体%基因干扰
髓鞘堿性蛋白%21.5kD MBP-shRNA錶達載體%基因榦擾
수초감성단백%21.5kD MBP-shRNA표체재체%기인간우
目的:构建21.5 kD MBP基因干扰序列21.5 kD MBP-shRNA(21.5 kD MBP short hairpin RNA interference),筛选最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真核表达载体,为21.5 kD MBP基因功能研究提供实验材料.方法:将21.5 kD MBP-shRNA阳性真核表达载体和阴性真核表达载体经脂质体介导分别转入人神经胶质瘤细胞株U251中,观察转染24 h后的转染效率；提取各组细胞总RNA,用实时荧光定量PCR技术检测各组21.5 kD MBP基因在mRNA水平的表达差异性.结果:21.5kD MBP-shRNA真核表达重组载体被成功转染人U251细胞,与阴性对照质粒(pGenesil-1-M BP-neg)转染组相比,沉默质粒转染组(pGenesil-1-MBP-1、pGenesil-1-MBP-2、pGenesil-1-MBP-3质粒分别转染)细胞中21.5 kD MBP mRNA表过水平均显著下降(P＜0.05),其中pGenesil-1-MBP-3转染组细胞中21.5 kD MBP mRNA表达水平最低.结论:成功筛选出最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真核表达载体,为21.5 kD MBP基因功能研究及基因治疗研究奠定了实验基础.
目的:構建21.5 kD MBP基因榦擾序列21.5 kD MBP-shRNA(21.5 kD MBP short hairpin RNA interference),篩選最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真覈錶達載體,為21.5 kD MBP基因功能研究提供實驗材料.方法:將21.5 kD MBP-shRNA暘性真覈錶達載體和陰性真覈錶達載體經脂質體介導分彆轉入人神經膠質瘤細胞株U251中,觀察轉染24 h後的轉染效率；提取各組細胞總RNA,用實時熒光定量PCR技術檢測各組21.5 kD MBP基因在mRNA水平的錶達差異性.結果:21.5kD MBP-shRNA真覈錶達重組載體被成功轉染人U251細胞,與陰性對照質粒(pGenesil-1-M BP-neg)轉染組相比,沉默質粒轉染組(pGenesil-1-MBP-1、pGenesil-1-MBP-2、pGenesil-1-MBP-3質粒分彆轉染)細胞中21.5 kD MBP mRNA錶過水平均顯著下降(P＜0.05),其中pGenesil-1-MBP-3轉染組細胞中21.5 kD MBP mRNA錶達水平最低.結論:成功篩選齣最佳沉默效果的21.5 kD MBP-shRNA真覈錶達載體,為21.5 kD MBP基因功能研究及基因治療研究奠定瞭實驗基礎.
목적:구건21.5 kD MBP기인간우서렬21.5 kD MBP-shRNA(21.5 kD MBP short hairpin RNA interference),사선최가침묵효과적21.5 kD MBP-shRNA진핵표체재체,위21.5 kD MBP기인공능연구제공실험재료.방법:장21.5 kD MBP-shRNA양성진핵표체재체화음성진핵표체재체경지질체개도분별전입인신경효질류세포주U251중,관찰전염24 h후적전염효솔；제취각조세포총RNA,용실시형광정량PCR기술검측각조21.5 kD MBP기인재mRNA수평적표체차이성.결과:21.5kD MBP-shRNA진핵표체중조재체피성공전염인U251세포,여음성대조질립(pGenesil-1-M BP-neg)전염조상비,침묵질립전염조(pGenesil-1-MBP-1、pGenesil-1-MBP-2、pGenesil-1-MBP-3질립분별전염)세포중21.5 kD MBP mRNA표과수평균현저하강(P＜0.05),기중pGenesil-1-MBP-3전염조세포중21.5 kD MBP mRNA표체수평최저.결론:성공사선출최가침묵효과적21.5 kD MBP-shRNA진핵표체재체,위21.5 kD MBP기인공능연구급기인치료연구전정료실험기출.
