中国医药工业杂志
中國醫藥工業雜誌
중국의약공업잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACEUTICALS
2013年
7期
663-668
,共6页
王利群%奚学志%曹利民%顾雅萍%孙培培
王利群%奚學誌%曹利民%顧雅萍%孫培培
왕리군%해학지%조이민%고아평%손배배
酵母胱硫醚β-合成酶%表达%活性
酵母胱硫醚β-閤成酶%錶達%活性
효모광류미β-합성매%표체%활성
yeast cystathionine β-synthase%expression%activity
将重组质粒pET45b-yCBS转入E.coli BL21中,构建高效表达酵母胱硫醚β-合成酶(yeast cystathionine β-synthase,1)的重组菌.研究诱导时菌体浓度、诱导剂IPTG浓度、诱导时间和温度,以及在培养基中添加不同浓度的山梨醇、葡萄糖、甘油对1表达量的影响.使用Ni2+亲和色谱柱纯化重组蛋白,再经His-Trap脱盐柱脱盐,以茚三酮法检测蛋白活性.结果表明,培养基中添加0.05％的山梨醇,重组菌在37℃培养3h后,添加终浓度为0.1 mmo/L的IPTG于20℃诱导培养15h,可溶性1表达量达到110 mg/L;纯化后比活为1 320 u/mg.
將重組質粒pET45b-yCBS轉入E.coli BL21中,構建高效錶達酵母胱硫醚β-閤成酶(yeast cystathionine β-synthase,1)的重組菌.研究誘導時菌體濃度、誘導劑IPTG濃度、誘導時間和溫度,以及在培養基中添加不同濃度的山梨醇、葡萄糖、甘油對1錶達量的影響.使用Ni2+親和色譜柱純化重組蛋白,再經His-Trap脫鹽柱脫鹽,以茚三酮法檢測蛋白活性.結果錶明,培養基中添加0.05％的山梨醇,重組菌在37℃培養3h後,添加終濃度為0.1 mmo/L的IPTG于20℃誘導培養15h,可溶性1錶達量達到110 mg/L;純化後比活為1 320 u/mg.
장중조질립pET45b-yCBS전입E.coli BL21중,구건고효표체효모광류미β-합성매(yeast cystathionine β-synthase,1)적중조균.연구유도시균체농도、유도제IPTG농도、유도시간화온도,이급재배양기중첨가불동농도적산리순、포도당、감유대1표체량적영향.사용Ni2+친화색보주순화중조단백,재경His-Trap탈염주탈염,이인삼동법검측단백활성.결과표명,배양기중첨가0.05％적산리순,중조균재37℃배양3h후,첨가종농도위0.1 mmo/L적IPTG우20℃유도배양15h,가용성1표체량체도110 mg/L;순화후비활위1 320 u/mg.
