重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2013年
13期
1447-1449,1453
,共4页
Notch信号通路%微小干扰核糖核酸%干扰质粒
Notch信號通路%微小榦擾覈糖覈痠%榦擾質粒
Notch신호통로%미소간우핵당핵산%간우질립
目的 设计及构建大鼠Notch1微小干扰核糖核酸(miRNA)干扰质粒,最终筛选出效果最好的干扰质粒.方法 针对大鼠Notch1基因分别设计3对pre-miRNA序列,通过T4连接酶克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miRNA表达载体构建干扰质粒,基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光确定转染效率,Western blot检测3对干扰质粒、阴性对照质粒对Noteh1胞内结构域(N1ICD)表达的影响.结果 测序表明,Notch1干扰序列及读码框完全正确,荧光显微镜观察H9c2心肌样细胞miRNA瞬时转染效率在80％左右.Western blot显示miRNA6637对Notch1干扰效果最强.结论 成功构建大鼠Notch1 miRNA的有效干扰质粒.为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础.
目的 設計及構建大鼠Notch1微小榦擾覈糖覈痠(miRNA)榦擾質粒,最終篩選齣效果最好的榦擾質粒.方法 針對大鼠Notch1基因分彆設計3對pre-miRNA序列,通過T4連接酶剋隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miRNA錶達載體構建榦擾質粒,基因測序鑒定,經Lipofectamine 2000轉染至H9c2心肌樣細胞,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光確定轉染效率,Western blot檢測3對榦擾質粒、陰性對照質粒對Noteh1胞內結構域(N1ICD)錶達的影響.結果 測序錶明,Notch1榦擾序列及讀碼框完全正確,熒光顯微鏡觀察H9c2心肌樣細胞miRNA瞬時轉染效率在80％左右.Western blot顯示miRNA6637對Notch1榦擾效果最彊.結論 成功構建大鼠Notch1 miRNA的有效榦擾質粒.為Notch1信號通路在心血管領域的功能研究奠定瞭基礎.
목적 설계급구건대서Notch1미소간우핵당핵산(miRNA)간우질립,최종사선출효과최호적간우질립.방법 침대대서Notch1기인분별설계3대pre-miRNA서렬,통과T4련접매극륭지pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miRNA표체재체구건간우질립,기인측서감정,경Lipofectamine 2000전염지H9c2심기양세포,형광현미경하관찰록색형광학정전염효솔,Western blot검측3대간우질립、음성대조질립대Noteh1포내결구역(N1ICD)표체적영향.결과 측서표명,Notch1간우서렬급독마광완전정학,형광현미경관찰H9c2심기양세포miRNA순시전염효솔재80％좌우.Western blot현시miRNA6637대Notch1간우효과최강.결론 성공구건대서Notch1 miRNA적유효간우질립.위Notch1신호통로재심혈관영역적공능연구전정료기출.
