重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2013年
13期
1490-1492
,共3页
杨艳%向加林%欧阳旭红%尹玲%于国辉
楊豔%嚮加林%歐暘旭紅%尹玲%于國輝
양염%향가림%구양욱홍%윤령%우국휘
真核表达载体%Hepa1-6肝细胞%实时荧光定量PCR%DUSP9基因
真覈錶達載體%Hepa1-6肝細胞%實時熒光定量PCR%DUSP9基因
진핵표체재체%Hepa1-6간세포%실시형광정량PCR%DUSP9기인
目的 构建小鼠DUSP9基因真核表达载体,并在小鼠Hepa1-6肝细胞中表达DUSP9蛋白.方法 采用RT-PCR方法,从小鼠肝组织获取DUSP9 cDNA片断,经双酶切、连接重组至真核表达载体pEGFP-N1,构建pEGFP DUSP9重组质粒,双酶切及DNA测序对该重组质粒进行鉴定.脂质体介导pEGFP-DUSP9转染Hepa1-6肝细胞,实时荧光定量PCR、Western blot检测DUSP9 mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 pEGFP DUSP9重组质粒经双酶切及测序鉴定证明构建完全正确,成功转染Hepa1-6肝细胞并高效表达,检测到明显上调的DUSP9 mRNA和蛋白表达水平.结论 成功构建真核表达载体pEGFP-DUSP9,并在Hepa1-6肝细胞中表达了DUSP9蛋白,可为研究DUSP9的生理功能及了解其在糖、脂代谢、胰岛素抵抗进程中的作用奠定坚实的基础.
目的 構建小鼠DUSP9基因真覈錶達載體,併在小鼠Hepa1-6肝細胞中錶達DUSP9蛋白.方法 採用RT-PCR方法,從小鼠肝組織穫取DUSP9 cDNA片斷,經雙酶切、連接重組至真覈錶達載體pEGFP-N1,構建pEGFP DUSP9重組質粒,雙酶切及DNA測序對該重組質粒進行鑒定.脂質體介導pEGFP-DUSP9轉染Hepa1-6肝細胞,實時熒光定量PCR、Western blot檢測DUSP9 mRNA及蛋白錶達水平的變化.結果 pEGFP DUSP9重組質粒經雙酶切及測序鑒定證明構建完全正確,成功轉染Hepa1-6肝細胞併高效錶達,檢測到明顯上調的DUSP9 mRNA和蛋白錶達水平.結論 成功構建真覈錶達載體pEGFP-DUSP9,併在Hepa1-6肝細胞中錶達瞭DUSP9蛋白,可為研究DUSP9的生理功能及瞭解其在糖、脂代謝、胰島素牴抗進程中的作用奠定堅實的基礎.
목적 구건소서DUSP9기인진핵표체재체,병재소서Hepa1-6간세포중표체DUSP9단백.방법 채용RT-PCR방법,종소서간조직획취DUSP9 cDNA편단,경쌍매절、련접중조지진핵표체재체pEGFP-N1,구건pEGFP DUSP9중조질립,쌍매절급DNA측서대해중조질립진행감정.지질체개도pEGFP-DUSP9전염Hepa1-6간세포,실시형광정량PCR、Western blot검측DUSP9 mRNA급단백표체수평적변화.결과 pEGFP DUSP9중조질립경쌍매절급측서감정증명구건완전정학,성공전염Hepa1-6간세포병고효표체,검측도명현상조적DUSP9 mRNA화단백표체수평.결론 성공구건진핵표체재체pEGFP-DUSP9,병재Hepa1-6간세포중표체료DUSP9단백,가위연구DUSP9적생리공능급료해기재당、지대사、이도소저항진정중적작용전정견실적기출.
