实用妇产科杂志
實用婦產科雜誌
실용부산과잡지
JOURNAL OF PRACTICAL OBSTETRICS AND GYNECOLOGY
2013年
4期
270-273
,共4页
王秋香%刘会玲%祝秉东%李海红%王千千%王海琳
王鞦香%劉會玲%祝秉東%李海紅%王韆韆%王海琳
왕추향%류회령%축병동%리해홍%왕천천%왕해림
PKM2%克隆%表达%纯化
PKM2%剋隆%錶達%純化
PKM2%극륭%표체%순화
目的:构建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白.方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2.经双酶切和DNA测序证实正确后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致.经SDS-PAGE分析,纯化后的蛋白约在58 KDa位,条带单一,无杂带出现.结论:成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础.
目的:構建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原覈錶達質粒,併在大腸桿菌中錶達,鎳離子柱親和層析法純化融閤蛋白.方法:用PCR方法從宮頸癌Hela細胞全基因組中擴增齣目的基因PKM2,通過剋隆載體pET30a(+)構建質粒載體pET30a(+)-PKM2.經雙酶切和DNA測序證實正確後,用Ni-NTA親和層析柱進行純化.結果:雙酶切鑒定所切下的片段大小與理論值相符,測序結果和報道一緻.經SDS-PAGE分析,純化後的蛋白約在58 KDa位,條帶單一,無雜帶齣現.結論:成功錶達純化瞭PKM2融閤蛋白,為腫瘤疫苗研製和腫瘤標誌物快速診斷的研究奠定基礎.
목적:구건인PKM2(M2-type pyruvate kinase)적원핵표체질립,병재대장간균중표체,얼리자주친화층석법순화융합단백.방법:용PCR방법종궁경암Hela세포전기인조중확증출목적기인PKM2,통과극륭재체pET30a(+)구건질립재체pET30a(+)-PKM2.경쌍매절화DNA측서증실정학후,용Ni-NTA친화층석주진행순화.결과:쌍매절감정소절하적편단대소여이론치상부,측서결과화보도일치.경SDS-PAGE분석,순화후적단백약재58 KDa위,조대단일,무잡대출현.결론:성공표체순화료PKM2융합단백,위종류역묘연제화종류표지물쾌속진단적연구전정기출.
