中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2012年
24期
5445-5448
,共4页
张能%张军%王子卫%查郎%何苗
張能%張軍%王子衛%查郎%何苗
장능%장군%왕자위%사랑%하묘
Krüppel-like factor4 (KLF4)%慢病毒载体%构建及验证%胃癌细胞
Krüppel-like factor4 (KLF4)%慢病毒載體%構建及驗證%胃癌細胞
Krüppel-like factor4 (KLF4)%만병독재체%구건급험증%위암세포
目的 构建Krüppel-like factor4(KLF4)过表达慢病毒载体,探讨其对胃癌细胞株BGC-823生物学行为的影响.方法 检测BGC -823中KLF4 mRNA的表达水平；用真核表达质粒pcDNA3.1IE-KLF4-EGFP,将KLF4基因连人慢病毒载体pLv-UbC-IRES2-EGFP中,构建pLv-KLF4-IRES2-EGFP重组慢病毒表达载体.将酶切和测序鉴定后的重组质粒转染至BGC-823中,观察转染情况,RT-PCR检测KLF4 mRNA.慢病毒包装后转染BGC-823细胞,Western印迹检测KLF4蛋白.结果 重组质粒经酶切和DNA测序证实目的基因插入正确；pcDNA3.1IE-KLF4-EGFP转染BGC-823细胞后KLF4 mRNA升高.慢病毒包装后转染BGC-823检测到目的蛋白KLF4.KLF4能够将细胞阻滞于G1/S,抑制其生长、促进细胞凋亡,减少细胞侵袭能力.结论 转染BGC-823后KLF4蛋白检测证实慢病毒载体成功构建,KLF4能抑制胃癌细胞的恶性转化.
目的 構建Krüppel-like factor4(KLF4)過錶達慢病毒載體,探討其對胃癌細胞株BGC-823生物學行為的影響.方法 檢測BGC -823中KLF4 mRNA的錶達水平；用真覈錶達質粒pcDNA3.1IE-KLF4-EGFP,將KLF4基因連人慢病毒載體pLv-UbC-IRES2-EGFP中,構建pLv-KLF4-IRES2-EGFP重組慢病毒錶達載體.將酶切和測序鑒定後的重組質粒轉染至BGC-823中,觀察轉染情況,RT-PCR檢測KLF4 mRNA.慢病毒包裝後轉染BGC-823細胞,Western印跡檢測KLF4蛋白.結果 重組質粒經酶切和DNA測序證實目的基因插入正確；pcDNA3.1IE-KLF4-EGFP轉染BGC-823細胞後KLF4 mRNA升高.慢病毒包裝後轉染BGC-823檢測到目的蛋白KLF4.KLF4能夠將細胞阻滯于G1/S,抑製其生長、促進細胞凋亡,減少細胞侵襲能力.結論 轉染BGC-823後KLF4蛋白檢測證實慢病毒載體成功構建,KLF4能抑製胃癌細胞的噁性轉化.
목적 구건Krüppel-like factor4(KLF4)과표체만병독재체,탐토기대위암세포주BGC-823생물학행위적영향.방법 검측BGC -823중KLF4 mRNA적표체수평；용진핵표체질립pcDNA3.1IE-KLF4-EGFP,장KLF4기인련인만병독재체pLv-UbC-IRES2-EGFP중,구건pLv-KLF4-IRES2-EGFP중조만병독표체재체.장매절화측서감정후적중조질립전염지BGC-823중,관찰전염정황,RT-PCR검측KLF4 mRNA.만병독포장후전염BGC-823세포,Western인적검측KLF4단백.결과 중조질립경매절화DNA측서증실목적기인삽입정학；pcDNA3.1IE-KLF4-EGFP전염BGC-823세포후KLF4 mRNA승고.만병독포장후전염BGC-823검측도목적단백KLF4.KLF4능구장세포조체우G1/S,억제기생장、촉진세포조망,감소세포침습능력.결론 전염BGC-823후KLF4단백검측증실만병독재체성공구건,KLF4능억제위암세포적악성전화.
