CAJ | 학술논문

为了快速获取高质量的苦瓜基因组DNA,以便进行苦瓜白粉病抗性基因分子标记研究,比较了不同的DNA提取方法、不同部位的苦瓜叶片提取基因组DNA的产量和质量,探究了苦瓜基因组DNA提取的最佳方法和叶片的最适部位；研究了ISSR-PCR的退火温度,并采用正交设计法对影响ISSR-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq酶、模板DNA以及引物浓度等5个因素进行了优化.结果表明,采用改良CTAB法从苦瓜顶端嫩叶中提取的基因组DNA OD260/OD280值在1.8～1.9之间,OD260/OD230值为2.0左右,对DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳检测,主带清晰,降解较少,产量和纯度均较高,效果较好.优化后的ISSR-PCR反应体系为:2.5 μL 10×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,250 μmol/L dNTPs,10 ng模板DNA,0.75 UTaq酶,引物浓度0.7 μmol/L,反应总体积为25 μL,引物UBC826最佳退火温度为53℃.该体系在多次重复中均能获得良好的扩增结果.苦瓜基因组DNA提取的最佳方法为改良CTAB法,最适合的部位为顶端嫩叶.
위료쾌속획취고질량적고과기인조DNA,이편진행고과백분병항성기인분자표기연구,비교료불동적DNA제취방법、불동부위적고과협편제취기인조DNA적산량화질량,탐구료고과기인조DNA제취적최가방법화협편적최괄부위；연구료ISSR-PCR적퇴화온도,병채용정교설계법대영향ISSR-PCR적Mg2+、dNTPs、Taq매、모판DNA이급인물농도등5개인소진행료우화.결과표명,채용개량CTAB법종고과정단눈협중제취적기인조DNA OD260/OD280치재1.8～1.9지간,OD260/OD230치위2.0좌우,대DNA양품진행경지당응효전영검측,주대청석,강해교소,산량화순도균교고,효과교호.우화후적ISSR-PCR반응체계위:2.5 μL 10×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,250 μmol/L dNTPs,10 ng모판DNA,0.75 UTaq매,인물농도0.7 μmol/L,반응총체적위25 μL,인물UBC826최가퇴화온도위53℃.해체계재다차중복중균능획득량호적확증결과.고과기인조DNA제취적최가방법위개량CTAB법,최괄합적부위위정단눈협.