中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
1期
17-22,26
,共7页
宫苗苗%曾妮%程朝飞%李刚
宮苗苗%曾妮%程朝飛%李剛
궁묘묘%증니%정조비%리강
狂犬病病毒%基质蛋白%原核表达%蛋白纯化%酶联免疫吸附试验
狂犬病病毒%基質蛋白%原覈錶達%蛋白純化%酶聯免疫吸附試驗
광견병병독%기질단백%원핵표체%단백순화%매련면역흡부시험
目的 以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体.方法 为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M.将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达.SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性.用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度.结果 经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性.用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%.结论 用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考.
目的 以原覈錶達的狂犬病病毒M蛋白作為檢測抗原,建立間接ELISA方法用來檢測狂犬病病毒抗體.方法 為錶達狂犬病病毒(RV)基質蛋白(M),採用RT-PCR方法從狂犬病病毒Flury-LEP株中擴增RV基質蛋白基因,雙酶切後定嚮剋隆至原覈錶達載體pET-32a(+),構建重組質粒pET-M.將重組質粒pET-M轉化至宿主菌E.coli Rosetta中進行錶達.SDS-PAGE和Western blot分析確定蛋白錶達量和特異性.用純化的重組M蛋白作為包被抗原建立檢測犬RV抗體的間接ELISA方法,通過優化反應條件,確定抗原最佳包被量、血清的最佳稀釋度、Protein A-HRP的最佳稀釋度.結果 經PCR、雙酶切及測序鑒定,重組質粒pET-M構建成功,將重組質粒進行轉化後誘導錶達,經SDS-PAGE電泳分析得到高效錶達的M蛋白,重組蛋白可被RV暘性血清特異性識彆,錶明基質蛋白具有良好的反應原性.用錶達的狂犬病病毒M蛋白建立瞭檢測RV抗體的間接ELISA方法,用該間接ELISA方法與以狂犬病病毒作為診斷抗原的商品化ELISA試劑盒分彆對93份臨床血清樣品進行檢測,結果兩者的符閤率為89.2%.結論 用原覈錶達的重組M蛋白作為包被抗原建立的間接ELISA方法可用做檢測犬RV抗體水平的參攷.
목적 이원핵표체적광견병병독M단백작위검측항원,건립간접ELISA방법용래검측광견병병독항체.방법 위표체광견병병독(RV)기질단백(M),채용RT-PCR방법종광견병병독Flury-LEP주중확증RV기질단백기인,쌍매절후정향극륭지원핵표체재체pET-32a(+),구건중조질립pET-M.장중조질립pET-M전화지숙주균E.coli Rosetta중진행표체.SDS-PAGE화Western blot분석학정단백표체량화특이성.용순화적중조M단백작위포피항원건립검측견RV항체적간접ELISA방법,통과우화반응조건,학정항원최가포피량、혈청적최가희석도、Protein A-HRP적최가희석도.결과 경PCR、쌍매절급측서감정,중조질립pET-M구건성공,장중조질립진행전화후유도표체,경SDS-PAGE전영분석득도고효표체적M단백,중조단백가피RV양성혈청특이성식별,표명기질단백구유량호적반응원성.용표체적광견병병독M단백건립료검측RV항체적간접ELISA방법,용해간접ELISA방법여이광견병병독작위진단항원적상품화ELISA시제합분별대93빈림상혈청양품진행검측,결과량자적부합솔위89.2%.결론 용원핵표체적중조M단백작위포피항원건립적간접ELISA방법가용주검측견RV항체수평적삼고.
