检验医学与临床
檢驗醫學與臨床
검험의학여림상
JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE AND CLINICAL SCIENCES
2013年
2期
137-139
,共3页
miR-1%慢病毒载体%293T细胞%绿色荧光蛋白
miR-1%慢病毒載體%293T細胞%綠色熒光蛋白
miR-1%만병독재체%293T세포%록색형광단백
目的 构建并鉴定大鼠miR-1慢病毒过表达系统.方法 采用EcoRⅠ酶双酶切将目的 基因从合成载体上酶切后连接入EcoRⅠ线性化慢病毒载体,连接产物转化后进行阳性克隆鉴定.成功构建的miR-1重组质粒与慢病毒辅助包装质粒及Lipofectamine 2000共转染293T细胞,产生慢病毒浓缩液并标定病毒滴度.重组慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),观察转染效率及miR-1表达水平.结果 测序结果显示目的 基因与Genebank序列完全一致;孔稀释法检测病毒滴度为3×108 TU/μL;以感染复数(MOI)50感染大鼠MSCs,感染效率达90%以上,聚合酶链反应显示miR-1高水平表达.结论 成功构建大鼠miR-1慢病毒表达载体并可高效转染大鼠MSCs,为进一步研究miR-1基因的相关功能提供了合适的载体.
目的 構建併鑒定大鼠miR-1慢病毒過錶達繫統.方法 採用EcoRⅠ酶雙酶切將目的 基因從閤成載體上酶切後連接入EcoRⅠ線性化慢病毒載體,連接產物轉化後進行暘性剋隆鑒定.成功構建的miR-1重組質粒與慢病毒輔助包裝質粒及Lipofectamine 2000共轉染293T細胞,產生慢病毒濃縮液併標定病毒滴度.重組慢病毒載體轉染大鼠骨髓間充質榦細胞(MSCs),觀察轉染效率及miR-1錶達水平.結果 測序結果顯示目的 基因與Genebank序列完全一緻;孔稀釋法檢測病毒滴度為3×108 TU/μL;以感染複數(MOI)50感染大鼠MSCs,感染效率達90%以上,聚閤酶鏈反應顯示miR-1高水平錶達.結論 成功構建大鼠miR-1慢病毒錶達載體併可高效轉染大鼠MSCs,為進一步研究miR-1基因的相關功能提供瞭閤適的載體.
목적 구건병감정대서miR-1만병독과표체계통.방법 채용EcoRⅠ매쌍매절장목적 기인종합성재체상매절후련접입EcoRⅠ선성화만병독재체,련접산물전화후진행양성극륭감정.성공구건적miR-1중조질립여만병독보조포장질립급Lipofectamine 2000공전염293T세포,산생만병독농축액병표정병독적도.중조만병독재체전염대서골수간충질간세포(MSCs),관찰전염효솔급miR-1표체수평.결과 측서결과현시목적 기인여Genebank서렬완전일치;공희석법검측병독적도위3×108 TU/μL;이감염복수(MOI)50감염대서MSCs,감염효솔체90%이상,취합매련반응현시miR-1고수평표체.결론 성공구건대서miR-1만병독표체재체병가고효전염대서MSCs,위진일보연구miR-1기인적상관공능제공료합괄적재체.
